中文摘要：

5-HT1A、5-HT2A/2B/2C受体和 GABA等受体与睡眠有密切关系，是当前世界研究的热点。双夏汤是中医治疗失眠的经方且为药对，体现了中医辨证论治，遣方用药的精神，但物质基础与机理不明。课题组掌握了建立基于细胞功能的针对5-HT受体（5-HT1A、5-HT2A/2B/2C）、GABAA的睡眠受体模型的核心技术，前期研究证实，双夏汤乙酸乙酯组分既能激动HT1A受体，又能拮抗HT2A和HT2C受体，表明其在减少REM睡眠和增加深睡眠方面具有协同作用，治疗失眠作用前景广阔，有必要深入研究。本研究利用多维指纹谱的示踪控制手段，从双夏汤药材配伍、化学成分组配伍、有效单体多层面的物质基础角度，结合体现中医征候特点的整体动物模型以及细胞受体模型，在整体动物、细胞和受体分子三个药理层面对双夏汤作用机理进行研究，揭示双夏汤治疗失眠的物质基础、作用机制及其配伍内涵。

结论摘要：

本研究旨在从双夏汤药材配伍、化学成分组配伍、有效单体多层面的物质基础角度，结合体现中医征候特点的整体动物模型以及细胞受体模型对双夏汤作用机理进行研究，揭示双夏汤治疗失眠的物质基础、作用机制及其配伍内涵。研究内容分1.通过半夏、夏枯草不同配比提取液液相色谱图对比以及果蝇行为学研究，筛选出半夏、夏枯草最佳配伍比例。2.建立睡眠相关受体细胞系，将5-HT1A质粒转染至HEK293细胞，以5-HT1A受体为靶标筛选双夏汤治疗失眠的活性组分。3.响应面法优化双夏汤总黄酮的提取工艺。4.以光照剥夺睡眠果蝇为模型进行双夏汤作用机理研究。5.双夏汤对PCPA剥夺睡眠模型大鼠的镇静催眠作用和机制探讨。6.双夏汤对肝郁失眠模型大鼠的镇静催眠作用和机制探讨。研究严格按照计划书完成，并根据双夏汤的药性理论，额外增加了双夏汤对肝郁失眠模型大鼠的镇静催眠作用研究和机制探讨。项目研究结果如下1.筛选出半夏夏枯草质量比为11时，治疗效果最佳。2.成功建立建立睡眠相关受体细胞系，进行细胞模型验证及生物学评价。3.对系统分离的化学成分组进行了药效学评价，筛选出双夏汤治疗失眠的组分为总黄酮，并优化了总黄酮提取工艺。4.建立果蝇行为学监测平台，在整体动物层面进行了作用机制研究并进行了果蝇脑内神经递质含量的检测，双夏汤可降低兴奋性DA、NE及其代谢产物HVA的含量，提高脑内5-HT/NE、5-HT/DA比值。5.PCPA剥夺大鼠睡眠评价中，进行了睡眠周期的检测；脑内神经递质含量的检测；免疫组织化学法检测脑内受体表达。6.肝郁失眠模型大鼠睡眠评价中，进行了敞箱实验、自主活动和戊巴比妥钠诱导睡眠作用，测定了生理指标、脑组织的单胺类神经递质含量。结果双夏汤水洗液对PCPA致失眠大鼠、肝郁失眠模型大鼠有明显镇静催眠作用，可能是通过调节单胺类神经递质和免疫系统发挥作用。研究创新性建立基于 pcDNA3.1-hygro 载体的睡眠相关受体表达载体；建立果蝇头部神经递质含量测定HPLC-ECD方法；建立果蝇行为学监测平台。研究取得成果如下获得授权专利1项（专利号ZL201110358422.2）；培养硕士研究生4名；发表核心期刊论文4篇， SCI论文1篇，全国性学术会议论文5篇。