利用4个多能性转录因子,通过反转录病毒载体,转染山羊体细胞,经过细胞重编程和去分化,将成体细胞转变为诱导多能干细胞(iPS细胞)。本研究建立了一套用于诱导山羊iPS细胞的技术路线,主要进展如下1)受体细胞分离鉴定从羔羊和成体奶山羊体内,分离了骨髓间充质细胞、成纤维细胞、脂肪前体细胞和胃上皮细胞等。研究发现,脂肪前体细胞出现iPS克隆的时间较早,而用成纤维细胞则获得了较为稳定的山羊iPS细胞系;2)多能因子的筛选本课题先后克隆了山羊的Sox2、Klf4、c-Myc和Nanog基因,羊Oct4基因的克隆工作还在进行中。由于缺少Oct4因子,用羊多能因子Sox2、Klf4、c-Myc和Nanog诱导细胞重编成的效率,比采用小鼠4因子的效率低;3)生物学检测对建系的山羊iPS细胞进行了细胞生物学和分子生物学检测,包括长期传代和生长活性测定、免疫组化检测、实时定量PCR测定、体外分化实验等。4)分离培养山羊ES细胞为探索多能细胞培养体系,本课题从山羊囊胚内细胞团中分离培养山羊胚胎干细胞,旨在建立山羊胚胎干细胞系并作为山羊iPS细胞的阳性对照。分离得到的内细胞团ES样细胞在体外传了15代
英文主题词goat; transcription factor: iPS cell: cell reprogramming: Oct4;