二核苷酸分子印迹聚合物(MIP)通过空间结构和关键位点识别碱基组成相同的系列二核苷酸衍生物,并可与靶分子特异性结合,衍生物侧链上不同基团对二核苷酸与MIP的结合不起决定性的作用;但MIP与碱基组成不同的二核苷酸和单核苷酸则无或仅有很弱的结合力。利用这些特点,构建可检测系列小分子DNA加合物的二核苷酸MIP检测系统。首先合成二核苷酸MIP,将待测DNA样品酶切消化为含加合物的二核苷酸和不含加合物的单核苷酸后,样品中的二核苷酸即可与相应的MIP特异结合,采用增强的化学发光结合单光子计数仪测定样品中的二核苷酸总量,即可确定碱基组成相同的一类小分子DNA加合物总量。本方法可灵敏、简单地检测样品中多种小分子DNA加合物总量,克服了一种常规抗体只能检测一种加合物以及不能检测未知物质形成的加合物这两个主要缺点,为DNA加合物检测提供了一种新方法。在医学、环境科学等多个学科将有广阔的应用前景。
本项目研究了以单核苷和二核苷为模板的分子印迹聚合物(MIPs)合成,分子印迹固相萃取(MISPE)分离和富集尿中8-OH-dG加合物,荧光核苷MIPs检测DNA加合物,并增加了利用电纺法合成分子印迹纳米膜(MIM)的初步研究。所取得的主要成果为1.优化了单核苷和二核苷MIPs的合成条件,首先报道了合成MIPs微球的溶剂调节沉淀聚合新方法,并对该方法的合成机理进行了探讨。2.利用MISPE分离和浓缩了尿中8-OH-dG加合物,为尿中8-OH-dG的检测提供了一种新的样品预处理方法。3.合成的荧光单核苷和二核苷MIPs不仅可特异性结合靶核苷,并可根据两者结合前后荧光量的变化,对尿和细胞样品中的DNA加合物进行了准确定量,所得结果与HPLC和23P后标法比较均无显著差异。4.首次报道了MIPs微球作为HPLC固定相,一次性浓缩、分离、直接测定大体积(40mL)湖水和自来水中超痕量(1nmol/L)模板分子。5.采用电纺法合成的核苷MIM可快速分离多种小分子DNA加合物,含两种MIPs的MIM可同时吸附水样和土样中两种结构不同的靶模板。核苷MIPs可测定生物样品中多种小分子DNA加合物。