用苏云金芽胞杆菌芽胞依赖型启动子BtI-BtII和非依赖型启动子pro3A,以及拷贝数目不同的质粒复制子ori1030,ori44和ori2060构建含杀虫晶体蛋白基因cry1Ac的不同穿梭载体,电转化到受体菌BMB171中,筛选出5种类型含不同遗传因子的转化子,在28℃和32℃条件下,用微量热法测定各类转化子的生长代谢热谱,并测定杀虫晶体蛋白(ICPs)的表达量,分析不同启动子和不同拷贝数质粒复制子对生长代谢热和cry1Ac蛋白表达的影响,以及生长代谢热产生与cry1Ac蛋白表达的关系。根据物理化学原理和微生物学背景,得出生长代谢过程的热化学和热动力学规律,建立苏云金芽胞杆菌生长代谢热动力学模型,从分子角度阐明细菌能量代谢的原理,为从能量代谢的途径提高ICPs基因的表达提出新理论。
用苏云金芽胞杆菌芽胞依赖型启动子BtI-BtII和非依赖型启动子pro3A,以及拷贝数目不同的质粒复制子ori1030,ori44和ori2060构建含绿色荧光蛋白基因gfp的不同穿梭载体,电转化到受体菌BMB171中得到了5种类型含不同遗传因子的转化子,用微量热法测得了生长代谢过程的热力学数据,并测定杀虫晶体蛋白(ICPs)的表达量,发现利用ori2062为复制区以芽胞依赖型启动子BtI-BtII驱动的GFP表达效果高,可以用来标记苏云金芽胞杆菌工程菌。将gfp片段融合在pro3A+cry1Ac10 C-末端构建融合基因,测得含融合基因重组菌的微量热动力学变化和蛋白表达水平差异相符。同时用微量热法首次测量了苏云金芽胞杆菌及其营养期杀虫蛋白基因工程菌的生长代谢热谱,进一步证明了微量热动力学变化可以反映蛋白表达情况。并分别测定Mn,Zn,Cu等生命微量元素对苏云金芽胞杆菌等的生长代谢热谱,反映了适当浓度的微量元素存在下苏云金芽胞杆菌代谢活性得到增强。根据物理化学原理和微生物学背景,得出生长代谢过程的热化学和热动力学规律。