中文摘要：

本课题组前期证实诱导型一氧化氮合酶（iNOS）与舌鳞癌转移和预后相关，沉默iNOS基因可抑制舌鳞癌细胞增殖，下调VEGF表达。近年研究发现，癌相关成纤维细胞（CAFs）可通过iNOS/NO信号通路影响恶性肿瘤的发生发展。鉴于局部侵袭、淋巴结和远处转移是舌鳞癌疗效不佳的主要原因，为探讨iNOS/NO在肿瘤微环境促进舌鳞癌侵袭转移的作用机制，本项目先分析舌鳞癌临床标本中CAFs浸润与iNOS及转移、预后的关系，再分选原代CAFs及人脐静脉内皮细胞，高通量技术筛选其分泌的细胞因子及激活的iNOS/NO上下游信号通路，同时在共培养模型中观察对舌鳞癌细胞侵袭转移、EMT及血管生成的影响，并在动物体内观察肿瘤侵袭转移能力的改变及肿瘤血管生成情况。通过本研究明确iNOS/NO在CAFs促进舌鳞癌侵袭转移中的作用机制，为阐明肿瘤侵袭转移机制提供新切入点，并为研制针对舌鳞癌侵袭转移的靶向药物提供实验基础。

结论摘要：

舌鳞癌是口腔颌面部最常见的肿瘤，具有易复发和转移的临床特点。目前的研究大多集中在舌鳞癌本身，对肿瘤微环境与舌鳞癌细胞相互作用的研究不足。本项目通过原代培养舌正常成纤维细胞（NFs）和癌相关成纤维细胞（CAFs），研究成纤维细胞对舌鳞癌侵袭转移的作用以及肿瘤微环境对成纤维细胞的激活作用。同时，探讨肿瘤微环境中多种细胞活性因子对舌鳞癌细胞上皮间质转化（EMT）和侵袭转移的作用及作用机制。实验中我们分析舌鳞癌患者临床标本发现CAFs的数量与舌鳞癌患者分期成正比，与患者的预后成反比。通过胶原酶法成功培养原代成纤维细胞，CAFs较NFs明显高表达α-SMA、FAP、SDF1等特异性标志物，具有更强的增殖、转移、胶原浓缩能力，能促进舌鳞癌细胞SCC9和CAL27的增殖转移，并证实通过诱导舌鳞癌细胞及EMT。进一步证实炎性因子TNFα通过促进舌鳞癌EMT进而促进其转移，证实CAFs通过分泌高水平基质细胞衍生因子SDF-1促进舌鳞癌细胞侵袭转移、EMT和血管生成。本项目组首次证实炎性因子TNFα能够诱导NFs活化为CAFs，其诱导活化的成纤维细胞具有与CAFs类似的促肿瘤作用。在前期基础上，本项目进一步探讨了肿瘤微环境中多种活性细胞因子对舌鳞癌的作用及机制。发现EGF、TGFβ都能诱导舌鳞癌细胞发生EMT进而促进其侵袭转移。进一步在体内外实验中在Akt信号通路中证实Ezrin Tyr353磷酸化激活NF-kB进而参与EGF诱导舌鳞癌SCC9和SCC25细胞EMT，并排除了信号通路ERT1/2和ROCK1在该过程中的作用。同时也证实在TGFβ诱导舌鳞癌EMT前后MicroRNA表达的显著差异，发现TGFβ诱导舌鳞癌细胞中miR-639明显下调，并对舌鳞癌细胞SCC9和CAL27细胞EMT过程具有决定性作用，以及miR-639靶向结合FOXC1参与EMT过程。本项目首次在舌鳞癌领域证实CAFs通过分泌SDF1诱导舌鳞癌细胞EMT及转移，也首次发现TNFα不仅能直接诱导舌鳞癌细胞EMT及转移，也能通过激活肿瘤微环境中成纤维细胞进而间接诱导舌鳞癌EMT和转移。同时也发现Akt/Ezrin Tyr353/NF-kB信号通路在EGF诱导舌鳞癌EMT和转移中的重要作用，以及miR-639靶向结合FOXC1在TGFβ诱导舌鳞癌EMT和转移中作用及机制，为靶向治疗舌鳞癌提供了多个重要靶点。