中文摘要：

本实验旨在从骨髓中分离出造血干细胞和基质干细胞。根据造血干细胞和骨髓基质干细胞不同的生物学特性，分别建立恰当的体外培养扩增体系。研究他们在形态和功能不变条件下的最大的扩增倍数，尽可能获得最大量的干细胞。利用肝脏发生、发育和再生过程中必须的特异的细胞因子，研究和建立最有效的体外诱导分化培养体系，促使造血干细胞和基质干细胞定向分化为成熟的肝细胞。动态观察定向分化过程中，细胞在蛋白、基因水平发生的变化。通过形态、表型和细胞功能方面的检测确定获得的细胞是否为成熟的有功能的肝细胞。获得的肝细胞用作构建生物人工肝，进行肝功能衰竭的治疗性研究。通过实验可以解决生物人工肝存在的肝细胞来源及安全性问题，获得满意的肝移植替代疗法。

结论摘要：

本课题探讨了小鼠骨髓多种干细胞的筛选和培养方法。建立了骨髓干细胞直接诱导、共同培养的方法，模拟了体内肝脏发生发育的环境和条件，初步建立以细胞因子为主的体外诱导培养体系，探讨骨髓干细胞体外转化肝细胞的可行性。以细胞因子FGF、HGF、OSM、EGF作为四个主要因素，每个因素设四个不同的浓度水平，通过均匀设计法，经逐步回归分析筛选出合理、有效的诱导培养体系。建立以30ng/ml FGF，30ng/ml OSM为主的最佳诱导培养体系。通过观察细胞形态和数量的变化；RT-PCR检测肝细胞特异性基因HNF-3?，ALB，CK18，TTR，G-6-Pase和TAT的表达变化；Western blot、免疫荧光染色、流式细胞仪检测肝细胞特异性蛋白HNF-3?，ALB，CK18的表达；通过糖原染色、白蛋白分泌及尿素合成检测细胞的合成和代谢功能。实验证明以30ng/ml FGF、30ng/ml OSM为主的诱导培养体系，可以有效地促进骨髓干细胞体外定向转化为有功能的肝细胞。进一步研究发现利用骨髓干细胞诱导分化的肝细胞建立内置生物人工肝，对急性肝功能衰竭具有一定的治疗作用。