目前已知端粒酶活性在胚胎组织中表达对维持干细胞复制和扩增能力具有重要意义,但它在人皮肤来源表皮干细胞中的作用如何尚不十分清楚。本研究采用表皮干细胞体外分离培养方法和RT-PCR、Western blot、免疫细胞化学及基因芯片等技术,比较观察不同发育阶段(胎儿期、少儿期和成年期)人表皮干细胞端粒酶活性表达特征及其基因表达谱的变化;采用脂质体介导的基因转染方法将构建的hTERT 和EGFP 双基因共表达重组真核表达质粒导入人表皮干细胞中,分析其增强人表皮干细胞端粒酶活性的可行性和作用。结果显示,人胎儿期、少儿期和成年期皮肤表皮干细胞端粒酶活性低水平表达;不同发育阶段表皮干细胞基因表达谱有明显不同,差异表达基因涉及蛋白质翻译、能量合成和DNA复制,均与表皮干细胞的发育进程密切相关;hTERT 基因转染人表皮干细胞能够增强其hTERT基因与蛋白的表达并维持表皮干细胞生物学特性。本研究为表皮干细胞进一步的基因修饰、单克隆筛选、细胞特异性表面标志物和分化机制研究、及获得皮肤组织工程标准种子细胞系奠定了实验基础。
英文主题词Epidermal stem cell; Telomerase; Cell proliferation; Gene transfection; Tissue engineering