中文摘要：

在我国半夏上鉴定了一个与大豆花叶病毒(SMV)相关的线状病毒(SMV-P)，分析揭示，它很可能是SMV与芋花叶病毒(DsMV)P1基因的重组产物，但SMV-P与两者的寄主范围差异显著。除P1基因外，它与SMV-P在外壳蛋白N-末端也有显著差异。基于重组病毒在学术研究上的价值，我们拟通过原核表达制备P1、HC-Pro、6K1、P3、6K2和CP抗血清，应用免疫胶体金标记定位它们在细胞内的分布，并结合酵母双杂交技术研究病毒编码蛋白间的互作，以期进一步了解这些蛋白的功能。同时构建SMV-P基因组RNA全长侵染性cDNA克隆，为后续研究病毒的功能、突变、进化与病毒间的异源重组现象奠定基础。

结论摘要：

原核表达制备了SMVP编码的各蛋白抗血清，并用于胶体免疫金标记等后续研究，结果表明P1蛋白定位在细胞质和叶绿体，而6K1蛋白定位在细胞膜，其余蛋白定位与已报道的结果类似。分别构建了T7和35S启动子控制的病毒全长cDNA克隆，但前者无侵染性，后者有待验证。构建了酵母双杂交试验表明，P1蛋白与病毒编码的蛋白均无互作，而CP与自身有强的互作。以SMVP P1蛋白为诱饵，筛选半夏酵母双杂交cDNA文库中，鉴定了与之发生强相互作用的半夏Rieske Fe/S蛋白，体外免疫共沉淀进一步确证两者互作。缺失突变分析表明互作区域为SMV-P P1蛋白的 N端1－82位氨基酸， SMVP P1 N 1-33位氨基酸部分与Rieske Fe/S 蛋白的N端信号肽互作，而SMVP P1N 33-82位氨基酸部分与Rieske Fe/S全序列互作，这种互作也同样存在相似病毒及寄主中。将SMVP P1基因转化拟南芥，共聚焦扫描显微镜观察P1仅分布在细胞质中。P1区序列重组是该类病毒适应不同寄主的重要机制之一，研究首次揭示P1-Rieske Fe/S protein的互作可能在这种适应中起重要作用。