温阳化饮和温阳利水法均是通过温阳以调节机体水失衡的治疗原则,其功效既相似又不同,其功效差异的内在机制至今仍不清楚,本研究拟从其对消化道、肾脏水通道蛋白和对ADH、AVP、cAMP等水通道主要调节因素的影响,阐明两者功效差异的内在基础。通过对比研究,观察温阳化饮法和温阳利水法在机体不同状态下,对水通道蛋白表达及其调节的影响,探讨温阳化饮和温阳利水的作用机制,比较二者在调节机体水液平衡过程中作用靶点的异同,冀以揭示二者临床功效差异产生的内在基础,为进一步阐明脾主运化水湿,肾主温煦气化的科学内涵,为深入研究脾阳虚、肾阳虚的证候本质奠定基础。
AQPs;warming Yang for resolving fluid;warming yang for diuresis;Therapeutic rule and method;Traditional Chinese
目的本研究为了观察温阳化饮法和温阳利水法在机体不同状态下对水通道及其调节的影响,分别以苓桂术甘汤和真武汤为代表方。方法分别研究两种方法对正常大鼠、脾阳虚和肾阳虚大鼠、阿霉素肾病大鼠,以及阿霉素脾阳虚和阿霉素肾阳虚大鼠水通道蛋白表达及其调控的影响。研究指标包括尿AQP2,消化道、肾脏AQP1~AQP4的表达,血AVP、cAMP. 结果 1.温阳化饮法和温阳利水法对正常大鼠尿AQP2的排除未见明显差异; 2.HE结果显示脾阳虚证没有造成大鼠肾脏的病理改变;免疫组化结果提示温阳化饮法可下调脾阳虚证大鼠肾脏组织AQP1和AQP2的表达;WesternBlot结果提示温阳化饮法和温阳利水法均可减少回肠组织AQP1的表达。 3. Elisa结果提示温阳利水法与温阳化饮法组尿AQP2量均增多,温阳利水法组尤为明显;可以下调阿霉素肾病模型肾脏组织AQP2的表达,而WesternBlot结果提示温阳利水法可以下调阿霉素肾病模型肾脏AQP4的表达;WesternBlot结果提示温阳利水法可下调阿霉素肾病模型回肠组织AQP1的表达。 4.阿霉素肾病脾阳虚病证结合大鼠中先病后证和病证同时组24小时尿蛋白无明显差异;免疫组化结果显示两组大鼠肾脏组织APQ1和AQP4表达明显增多,AQP2的表达反而少于阿霉素肾病大鼠;WesternBlot结果提示阿霉素肾病脾阳虚先病后证者肾脏AQP3表达量最多,阿霉素肾病模型组回肠AQP3表达量减少。 5.温阳化饮法和温阳利水法对减少阿霉素肾病脾阳虚病症同时模型的尿蛋白未见明显差异; 6. 阿霉素肾病模型组、阿霉素肾病肾阳虚证模型组中尿蛋白升高,血白蛋白降低,而胆固醇升高;激素作用后其尿蛋白没有改善,且持续升高;阿霉素肾病模型组、阿霉素肾病肾阳虚证模型大鼠尿17-OHCS结果与文献报道的结果有差异,这可能与阿霉素对肾上腺的损伤有关,需要进一步实验验证。结论 温阳化饮法和温阳利水法没有影响正常大鼠水通道蛋白的表达。温阳化饮法对脾阳虚证的作用机制可能是通过对肾脏和消化道水通道蛋白的调节来实现的;而温阳利水对脾阳虚证的作用机制可能是通过消化道水通道蛋白的调节来实现的。温阳利水法对阿霉素肾病的作用机制是通过对肾脏水通道蛋白的调节来实现的;温阳化饮法对阿霉素肾病的作用机制是通过对消化道水通道蛋白的调节来实现的。阿霉素肾病脾阳虚病证