中文摘要：

癫痫发生导致组织酸化，后者可激活酸感受离子通道（ASICs），关于ASICs作用于癫痫的起始或终止阶段，目前研究意见不一致。课题组前期研究发现，抑制ASICs可增加痫性发作，酸性液体灌流可抑制痫性发作。本项目拟在急性分散海马神经元、培养海马脑片、癫痫动物模型等水平，联合运用RNA干扰、全细胞膜片钳、脑片培养、荧光定量PCR、脑电图、激光共聚焦显微技术、脑pH值检测等方法，检测激活/抑制ASICs不同亚基对脑电活动、胞浆钙浓度、神经元凋亡、pH值的影响，及组织酸化时ASICs激活与电压门控Na+通道、Na+/H+泵之间的关系。以进一步证实癫痫的终止机制，即"癫痫- - 组织酸化- - ASICs激活- - 痫性发作抑制"的负反馈机制，并明确ASICs激活与癫痫终止的中间机制。为探讨癫痫发病机制，及寻求新的癫痫治疗方案提供理论基础与试验依据。

结论摘要：

癫痫发生导致组织酸化，后者可激活酸感受离子通道（ASICs），关于ASICs作用于癫痫的起始或终止阶段，目前研究意见不一致。本项目在基因、急性分散海马神经元、癫痫动物模型等水平，联合全细胞膜片钳、RT-PCR、脑电图、免疫组化技术，检测激活/抑制ASICs对海马神经元兴奋性、脑电活动、基因表达的影响。课题组发现，1）酸感受离子通道激活（酸性细胞外液）0～30 min时段，可增加匹鲁卡品致痫大鼠脑电图的放电次数，但不改变放电间期及波幅；2）酸感受离子通道抑制（阿米洛利）可减少匹鲁卡品致痫大鼠脑电图的放电次数，并延长放电间期，降低波幅（60～90 min）； 3）酸感受离子通道激活（酸性细胞外液）可增加培养海马神经元动作电位的放电频率，但不改变基本电流强度等参数；阿米洛利可降低酸性细胞外液处理的海马神经元的放电频率；4）无镁外液处理可增加培养海马神经元动作电位的放电频率，并降低基本电流强度，阿米洛利可降低无镁外液处理的海马神经元的放电频率，增加基本电流强度。5）与对照组比较，痫性发作大鼠海马ASIC 1a和ASIC 3基因表达增加，给予阿米洛利后，ASIC 1a和ASIC 3基因表达与对照组差异无统计学意义；6）与对照组比较，痫性发作大鼠海马Na+/H+泵(NHE)基因表达增加，给予阿米洛利后，NHE基因表达与对照组差异仍增加。ASICs激活可增加大鼠痫性发作，ASICs抑制可终止大鼠痫性发作，其机制可能与ASICs对海马神经元兴奋性的影响，及痫性发作时ASIC 1a和ASIC 3基因表达变化有关，与痫性发作时NHE基因表达变化无关。