采用致突变菌株和易错PCR技术随机诱变细菌耐碱性纤维素酶基因,构建酶的突变体库,从中筛选酶的活性和耐碱性提高的突变体,分析影响酶的活性和耐碱性的关键aa残基或序列,进一步采用定点诱变等手段对酶分子进行改造。在此基础上研究酶的结构与功能的关系,分析酶的耐碱机理,同时构建高效产酶的工程菌,为耐碱性纤维素酶的工业化大生产奠定基础,具有理论和实际应用双重重要意义。
本课题采用致突变菌株和易错PCR等定向进化技术手段随机诱变细菌耐碱性纤维素酶基因,构建酶的突变体库,从中筛选酶的活性和耐碱性提高的突变体,通过氨基酸序列比对,分析影响酶的活性和耐碱性的关键氨基酸残基或序列区域,结合发表的文献报道,进一步采用定点诱变等蛋白质工程技术对酶分子进行有目的的改造,获得了一些酶的活性和耐碱稳定性提高的突变体。为从理论上探讨酶的结构与功能的关系,为酶的耐碱机理研究积累了实验数据,也从应用上为改造工业用酶提供了新的思路。