中文摘要：

肝细胞凋亡与肝细胞损伤密切相关。内质网氧化应激介导Caspase蛋白酶活化是引起细胞凋亡一个新的途径。Caspase-12是内质网应激介导细胞凋亡的特异性关键启动蛋白酶，抑制Caspase-12蛋白酶活性可阻断凋亡的发生从而防止肝损伤。本研究设计并合成针对Caspase-12 基因序列的柄-环发夹式小分子干扰RNA（siRNAs），通过siRNAs诱导基因失活的表达载体导入肝细胞内，观察抗Caspase-12siRNAs在细胞内表达、对Caspase-12mRNA的切割，分析抗Caspase-12siRNAs对内质网应激介导肝细胞凋亡的调控以及对肝细胞损伤的干预，评估该siRNAs作为新一代治疗性RNA在治疗肝脏疾病中的作用和地位，为内质网氧化应激相关性疾病的治疗药物的开发提供技术平台。

结论摘要：

内质网（ER）应激介导的肝细胞凋亡与非酒精性脂肪性肝炎、胆汁淤积性肝病及病毒性乙型、丙型肝炎的发生密切相关。Caspase-12是ER应激介导细胞凋亡的关键启动蛋白酶，抑制其活性可能阻抑凋亡的发生从而减轻肝损伤。本研究设计并构建了靶小鼠Caspase-12小分子干扰RNA（siRNA）的真核表达载体pRNAT-Casp12，利用pRNAT-Casp12转染小鼠肝癌细胞株Hepa1-6，观察其对Caspase-12基因的抑制及其对内质网介导的肝细胞凋亡的影响。研究结果发现靶基因 mRNA的表达水平在细胞转染后24小时、48小时和72小时，分别下降了45.6%、72.5%和59.5%；蛋白表达下降了17.1%、37.3%和60.1%。在细胞凋亡的诱导试验中，经DNA凝胶电泳梯带检测，发现毒胡萝卜素(TG) 2 μmol/L处理细胞30小时能够成功地诱导细胞凋亡。利用TG诱导干扰组细胞，通过DNA电泳、流式细胞仪、Hoechst检测发现pRNAT-Casp12明显降低了细胞的凋亡率，对治疗或减轻内质网凋亡相关性肝病的肝细胞损伤起到了一定的作用。