通过Blast检索,设计简并引物,以斜纹夜蛾、甜菜夜蛾、小菜蛾和桔小实蝇的cDNA分别为模板,克隆得到8个CSPs基因和2个GOBP基因。以用Northern 杂交、RT-PCR半定量 及Western 杂交技术分析了CSPSlit、BdorCSP、 PlxyCSP1和PlxyCSP2在试虫不同组织中的表达情况显示CSPs在各组织均有表达,但存在量的不同;RT-PCR半定量方法研究PlxyCSP1-4和BdorCSP在小菜蛾和桔小实蝇各个发育阶段的表达量,结果表明CSPs存在于整个发育期,其表达量随发育阶段的不同而变化。CSPs时空分布的广泛性预示其可能参与多种生理活动。同时构建了pET28a-CSPSlit、-PlxyCSP1、-PlxyCSP2和-BdorCSP 4个表达载体,分离纯化得到4种高纯度重组蛋白。应用荧光猝灭法研究昆虫CSPs与闹羊花素Ⅲ的结合特性显示4个CSPs都与闹羊花素Ⅲ相结合,均属于静态猝灭;Discovery Studio模拟结合的结果与荧光猝灭实验结果一致,证明了CSPs是闹羊花素III对昆虫产卵忌避的作用靶标的观点,为开辟害虫治理新领域奠定了理论基础。
英文主题词Rhodojapnin Ⅲ; oviposition deterrent; chemosensory proteins; mechanisms of action