酶作为生物催化剂对生物产业具有重大影响,但其较低的生物学稳定性限制了其广泛应用,因此探求蛋白质稳定化作用机制、建立有效的蛋白质稳定化策略是科学工作者们密切关注的热点。由于蛋白质结构的复杂性,尚未发现通用的蛋白质稳定化机制。酶活性中心是催化的关键部位,而且其较强的柔性使酶极易在整体结构没有明显变化的条件下发生微环境变化,从而导致酶失活。本项目针对酶活性中心的易变性,选择微生物脂肪酶CALB为研究对象,以结构信息为基础,探讨活性中心不同范围内高B因子残基对酶稳定性的影响,结合酶动力学和热力学分析,阐明活性中心区域对酶催化动力学稳定性的影响和作用机制,为能源、医药和化工等工业应用提供所需的新酶源。
英文主题词molecular design;active site;kinetic stability;iterative saturation mutagenesis;crystal structure