木瓜蛋白酶是存在于木瓜果实中的一种蛋白酶,属于半胱氨酸蛋白酶中的一种。本文选择木瓜蛋白酶为半胱氨酸蛋白酶的模型酶。首先首先通过噬菌体展示技术,筛选出了对木瓜蛋白酶亲和力最强的10个多肽,其中亲和力最强的是Ile-Gln-Ser-Pro-His-Phe-Phe。然后以戊二醛为交联剂,以交联的噬菌体为亲和基质,制备出了一种新型的对木瓜蛋白酶有特异性亲和作用的交联噬菌体7肽亲和介质CAPOP。将其用于木瓜蛋白酶的纯化,研究结果表明在蛋白酶液浓度为15.59 mg/ml,pH 6.97,25.80℃时,达到最大静态吸附量为148.25 mg/ml。同时,将本文制备的新型分离纯化介质初步应用于纯化木瓜蛋白酶,结果表明在洗脱液为1 M NaSCN,pH 9.0,洗脱速度1.0 ml/min时,分离纯化倍数达到240.94.本项目还对木瓜蛋白酶在新型吸附介质的吸附机理进行了探讨,结果表明等温吸附模型符合Freundlich模型,动力学模型符合二级动力学模型,热力学行为表明随着温度的增加,熵减焓减,说明吸附行为在25℃有最佳吸附效率和吸附量。
英文主题词Cystatim; affinity chromatography;phage display; cross-linked;papain