本项目拟在既往成功研究的基础上,对兔激素性股骨头坏死模型用云南彝药恒古骨伤愈合剂治疗,于不同时段直接提取兔股骨头中总RNA后用RT-PCR法对坏死股骨头中Cbfa1基因表达作定量分析;用原位杂交和免疫组织化学方法结合计算机图像分析技术检测坏死股骨头内VEGF的表达水平;用MRI检测股骨头内坏死骨体积的定量结果评价恒古骨伤愈合剂治疗兔激素性股骨头坏死的效果,并与Cbfa1基因和VEGF表达的量作多项分类Logistic回归分析,以期率先进一步从分子水平探索恒古骨伤愈合剂治疗股骨头坏死的作用机理,为临床应用提供理论依据,为恒古骨伤愈合剂的现代化开发及分子机理研究打下坚实的基础。该药为国准字中药,故研究成果可直接转化为生产力,带来巨大的社会效益和经济效益,对激素性股骨头坏死治疗具有重大的现实意义。
本研究通过对坏死股骨头修复的血管生成、成骨细胞发育分化和骨形成调控、骨形成的刺激诱导骨化等几个关键基因的动态观察,来探索恒古骨伤愈合剂治疗SANFH的分子机理。我们使用小剂量(10μg/kg体重)内毒素加大剂量激素注射的方法建立了兔SANFH模型,在用恒古骨伤愈合剂治疗后,经组织学观察发现坏死股骨头内骨结构修复较快,而经DR及MRI评估发现差异无统计学意义。在采用免疫组化、原位杂交和RT-PCR等技术研究中直接快速提取出了兔股骨头内总RNA;设计合成了兔cbfa1基因的引物;用定性和定量方法相互印证。结果均发现,兔SANFH模型坏死股骨头内VEGF、cbfa1和BMP-2基因的表达受抑制;而恒古骨伤愈合剂可促进兔坏死股骨头内源性VEGF、cbfa1和BMP-2基因表达,以用药时间长者表现明显。比较研究发现,普法他汀也可通过调节体内脂质代谢、上调坏死股骨头内源性BMP-2、VEGF和Cbfa1的表达,对股骨头坏死的再生修复起着促进作用,有望成为治疗早期激素性股骨头坏死的有效药物。研究还发现恒古骨伤愈合剂可治疗兔SANFH模型所致的兔骨质疏松症。可望为恒古骨伤愈合剂的临床应用提供理论基础