中文摘要：

E2F8基因在肝癌中表达上调，影响肝癌细胞PLC/PRF/5的细胞周期从而控制细胞生长，同时也已知E2F8基因能够在不同环境中发挥不同的细胞学效应。本申请项目基于我们的前期工作基础和乙肝病毒性肝癌中HBX的致癌机制，提出E2F8是否依赖HBX活化β-catenin/Wnt信号通路而促进肝癌细胞生长以及E2F8如何依赖HBX而活化β-catenin/Wnt信号通路的问题。研究E2F8分别对HBX阳性/阴性细胞增殖、克隆形成能力、成瘤能力、细胞周期、凋亡的影响；E2F8分别对HBX阳性/阴性细胞中β-catenin转录表达、蛋白稳定性及细胞核质定位、通路中其它相关成员转录表达的影响；体外研究E2F8,HBX,β-catenin基因之间的相互关系；进一步结合小鼠模型探讨三者在体内的作用机制。因此，本课题拟研究E2F8基因在乙肝病毒性肝癌发病中的分子机制，解释E2F8条件依赖性发挥功能的分子机理。

结论摘要：

原发性肝癌（以下简称肝癌）是威胁我国人民身体健康的重大疾病。在我国所有肿瘤中肝癌发病率居2-3位，肝癌死亡率居第2位，严重危害了我国人民身体健康。肝癌治疗效果差、死亡率高的主要原因是肝癌缺乏早期诊断指标和有效的药物，而开发早期诊断指标和有效的药物有赖于对肝癌发病机制的深入了解。而目前，人们对肝癌的发病机制知之甚少，成为开发肝癌诊治方案的限制瓶颈。本项目首先探讨了非典型性E2F家族成员E2F7、E2F8基因在肝癌细胞生长、分化的作用及相关的分子机制。实验结果表明癌组织中E2F7基因的表达量明显高于相应的癌旁组织，两者比较有明显统计学差异（P<0.001）；转录因子E2F7可与β-catenin相互作用并促进β-catenin进入细胞核；E2F7促进Wnt/β-catenin信号通路的活性。另外，在肝癌细胞中干扰E2F8的表达可以导致胚胎/干祖细胞的标志物表达上调，而成熟肝脏细胞分子标志物ALB则明显的表达下调；在成球培养条件下，干扰E2F8后发现成球细胞克隆个数增多以及球克隆变大。RNA干扰E2F8表达后Ezh2和Suz12的表达水平上调。进一步的研究结果表明E2F8通过调控Ezh2和Suz12对肝癌细胞的细胞周期以及分化进程起着重要的作用。与此同时，在本项目的资助下我们还利用了先进的DNA测序技术，对乙肝病毒感染相关的肝癌原发灶和侵犯肝脏门静脉的转移灶的全部基因外显子，进行了对比分析。在10例病人样本，发现了347个突变基因。在这些突变基因中，哪些才起决定性作用？我们又进行了大规模的功能试验分析。我们发现，ARID1A、VCAM1、CDK14等基因突变，在肝癌的发病和转移中，发挥了关键作用。在细胞水平上的实验证明，ARID1A、VCAM1基因功能正常时，能抑制肿瘤细胞，一旦发生突变，使它们功能下降甚至丧失时，肝癌细胞就会如脱缰野马，增殖加快、运动和侵袭能力增强。这是世界上第一次利用新型大规模基因组分析技术研究肝癌转移问题，所获结果将为肝癌诊断、预后、治疗，以及开发新型治疗药物奠定基础。该研究成果发发表于国际顶尖学术杂志《自然遗传学》（Nature Genetics）。 肿瘤/睾丸抗原（CT抗原）是一类具有特异性表达模式的肿瘤相关抗原，其中一些CT抗原被认为是一类理想的肿瘤治疗靶标。有些CT抗原基因对肿瘤细胞生存具有重要作用，但哪些CT抗原基因能作为肝癌治疗靶标尚不