生命体DNA受到破坏发生双链断裂后,会引起DNA损伤和修复机制的一系列级联响应,许多相关蛋白被激活、修饰并在DNA损伤处形成蛋白聚点以开展修复进程。免疫荧光显微观测可见些蛋白聚点成微米大小的亮点。这些蛋白聚点的内部结构和蛋白分布对于研究DNA损伤和修复机理、相关蛋白角色和相互作用、肿瘤放射治疗和辐射防护具有重要意义。但是由于受传统光学显微镜的分辨率限制,无法获得高清晰的聚点图像,聚点的内部信息至今仍处于未知状态。本项目使用X射线和高能重离子辐照MRC5与HeLa细胞,用可控开关荧光分子染色γ-H2AX和53BP1蛋白,采用最新的超分辨显微技术STORM来获取这些蛋白聚点的单分子纳米超分辨图像,研究DNA损伤修复聚点的高清结构及γ-H2AX和53BP1蛋白在聚点内的分布,研究聚点形态和结构与DNA修复动态、细胞周期等的关系及不同辐射品质下DNA损伤修复的特点,揭示DNA损伤修复机理。
英文主题词DNA damage and repair;g-H2AX;53BP1;XRCC1;live cell imaging