中文摘要：

体外培养室管膜下区神经干细胞和雪旺氏细胞，并进行Nestin、Thy1.1、NSE、MAP、GFAP、S-100等鉴定。采用有限稀释法使该单细胞纯化，并建立永生化室管膜下区神经干细胞系。通过逆转录病毒载体将BDNF转染到培养的Nestin阳性克隆的室管膜下区神经干细胞中；将Nestin阳性克隆的室管膜下区神经干细胞和用BDNF转染的室管膜下区神经干细胞及雪旺氏细胞联合用BDNF转染的室管膜下区神经干细胞分别再用GFP标记后移植到大鼠玻璃体腔和视网膜下间隙，观察在宿主体内的存活、迁移和分化以及对宿主结构和功能的影响。为神经干细胞眼内移植治疗视神经和视网膜疾病提供最佳的种子细胞；并寻找能够特异、高效地分化为视网膜神经节细胞的方法；为视神经和视网膜细胞损伤后的再修复和视功能的重建、为青光眼等视网膜视神经病变的治疗开辟了新途径；也为神经再生的研究增加了新内容和作出有益的尝试。

结论摘要：

体外培养室管膜下区神经干细胞和雪旺氏细胞，采用有限稀释法和连续传代法纯化神经干细胞，并测定纯化后神经干细胞的生长曲线。对神经干细胞分化前后进行Nestin、Thy1.1、NSE、GFAP鉴定。通过逆转录病毒载体将BDNF基因导入培养的Nestin阳性克隆的神经干细胞中。用GFP作为标记，将Nestin阳性克隆的神经干细胞、携带BDNF基因的神经干细胞、BDNF基因修饰的神经干细胞联合雪旺氏细胞分别移植到大鼠视网膜下间隙。利用HRA、OCT、VEP观察各组细胞在宿主体内的存活、迁移情况及对宿主视功能的影响，冰冻切片和石蜡切片观察各组细胞在视网膜的整合和分化情况。结果观察到各组移植细胞在视网膜内均存活良好，并向远距离迁移，后两组迁移的距离和面积更大，不影响视功能，且随着时间的延长，神经干细胞向神经元分化的比率增加，均可观察到视网膜神经节细胞的表达，但联合移植组表达率更高，证明BDNF和雪旺氏细胞对神经干细胞的存活和定向分化有促进作用。这些为视神经和视网膜细胞损伤后的再修复和视功能的重建、为青光眼等视网膜视神经病变的治疗做出了有益的尝试。