中文摘要：

Skp2是泛素－蛋白酶体通路中与细胞周期相关的E3连接酶－SCF复合物中的底物识别亚基，本项目旨在揭示Skp2作为AKT的效应分子调控肿瘤细胞异常增殖的分子机制。研究内容1）构建Skp2突变体，分析AKT和Skp2之间的相互作用及其相互作用区域，同时分析AKT对Skp2的体内外磷酸化修饰作用及其磷酸化位点；2）以AKT活化的HeLa细胞为模型，分析Skp2突变体S72A（失活）和S72D（活化）

结论摘要：

Skp2是泛素－蛋白酶体通路中与细胞周期相关的E3连接酶－SCF复合物中的底物识别亚基，本项目旨在揭示Skp2作为AKT的效应分子调控肿瘤细胞异常增殖的分子机制。获得的实验进展和结果1）构建Skp2缺失突变体Skp2ΔF，AKT突变体KD AKT和myr AKT，以及Skp2 RNAi的细胞模型；2）通过PKB的抑制剂或转染KD AKT或Myr AKT，发现AKT能正调控HeLa细胞中Skp2的表达，抑制SKP2表达后细胞有明显的G2/M周期阻滞；3）通过免疫共沉淀和GST pull down实验表明，AKT和Skp2之间能相互作用；4）原核表达纯化GST-Skp2，通过体外磷酸化反应，表明AKT对Skp2能进行体外磷酸化修饰作用；5）以AKT活化的HeLa细胞为模型，分析Skp2突变体S72A（失活）和S72D（活化）以及内源性Skp2，在AKT活性受抑制或激活前后的细胞学定位及稳定性的变化的研究有待于进一步研究。本课题初步探索了AKT调控Skp2参与肿瘤细胞异常增殖的分子机制，同时为以Skp2及AKT信号通路作为肿瘤治疗的分子靶标的研究提供理论指导。