中文摘要：

基因不稳定在癌易感因素中是一个很重要的因素，但目前为止对基因不稳定如何引起的机制还不清楚。在前期研究中，我们通过基因微阵列分析发现了DNA聚合酶delta亚基POLD4在小细胞肺癌中表达量低下，并运用siRNA技术及构建silent mutation突变质粒研究了POLD4部分功能。我们拟进一步在体外探讨与POLD4相互结合的蛋白，在Calu6细胞内野型P53过表达后运用流式细胞仪观察G1期变化，分析POLD4与P53的相关性，探讨在Calu6细胞内POLD4低表达引起G1期阻滞的具体分子机制，研究POLD4与Bloom在非小细胞肺癌细胞中与小细胞肺癌细胞中结合差异，并进一步利用裸鼠在体内验证POLD4在体外的一些功能，特别是论证在POLD4低表达状态下吸烟因素可能在癌的形成过程中起重要作用。通过研究旨在为临床开发相关肿瘤的靶向治疗或为肿瘤的预防提供一些依据。

结论摘要：

在前期研究中通过siRNA剔除POLD4表达导致G1期相关蛋白P21、P27升高，部分细胞阻滞在G1期。在本实验中，我们通过siRNA P21,P27剔除P21、P27的表达，再用siRNA POLD4剔除POLD4表达，通过流式细胞仪发现在剔除P27基础上剔除POLD4表达不再使细胞阻滞在G1期，而剔除P21基础上剔除POLD4却仍使细胞阻滞在G1期，由此考虑siRNA介导的POLD4低表达引起的G1期阻滞关键是P27起作用的。在Calu6细胞中通过western blot方法揭示siRNA介导的POLD4低表达导致p-AKT、skP2、P27-p187表达降低，P27升高。进一步，我们通过建立Calu6 POLD4 silent mutation质粒能挽救上述表型，由此我们考虑POLD4低表达可能通过AKT-skp2-p27途径使细胞阻滞在G1期。另外，我们应用前期构建的POLD4-pcDNA3质粒在293T细胞中过表达POLD4，通过LTQ质谱分析，得到128个可能与POLD4结合的蛋白，筛选其中与细胞核相关的蛋白HNRNFP进行免疫共沉淀实验，但结果显示它们无相互作用。此部分研究可能在今后还需进一步探索。