中文摘要：

将抗多种常见恶性肿瘤细胞的通用表面抗原的单链抗体e23sFv基因、具有膜转位作用的多肽基因与促凋亡蛋白基因融合，表达出新型肿瘤靶向性杀伤蛋白。这类蛋白识别肿瘤细胞后，可以内化并转位进入细胞液中，诱导细胞凋亡。本研究拟将对公认的癌相关标志物HER2的抗体作为特异性导向物，绿脓杆菌外毒素转膜结构域PE domainⅡ作为膜转位结构区,与活性tBID蛋白融合,构建一个能分泌性地表达HER2靶向重组的活性tBid融合蛋白，使其能特异地识别并内化入HER2阳性乳腺癌、胃癌、肺癌等肿瘤细胞内，引发凋亡的级联反应，特异性地杀伤原位和转移的肿瘤细胞。这一策略可望发展成为对各种常见的HER2阳性的骨转移癌的一种行之效的辅助性基因治疗方法。

结论摘要：

HER2/neu是一种在乳腺癌、胃癌、成骨肉瘤等多种恶性肿瘤中广泛过表达的表皮生长因子家族受体。将抗肿瘤表面抗原HER2的单链抗体，绿脓杆菌外毒素的膜转位肽段和活性tBid融合，构建靶向促凋亡蛋白及其表达载体。在体外实验中，将tBid融合蛋白的基因修饰人HeLa细胞系，借助信号肽的作用持续分泌靶向促凋亡分子。建株的HeLa细胞上清与多种细胞系体外共培养，证实它们可以选择性地杀伤HER2阳性的肿瘤细胞，表明细胞分泌的靶向促凋亡蛋白可以借助抗体识别肿瘤细胞，内化并转位进入细胞液中，诱导肿瘤凋亡。在动物实验中，建立HER2阳性实体瘤裸鼠模型和乳腺癌骨转移裸鼠模型。将分泌型靶向促凋亡蛋白的真核表达载体和重组腺病毒颗粒，通过肌肉和尾静脉注射输入荷瘤裸鼠体内，使相应组织细胞分泌上述融合蛋白，均可有效地抑制体内肿瘤生长和骨转移，并延长裸鼠存活期。免疫组化显示，分泌蛋白特异性地分布于肿瘤组织，而在正常组织中存在很少。表明这种由自身细胞分泌的靶向促凋亡分子可以通过血液循环到达全身各处，识别并杀伤原发和转移病灶区的肿瘤细胞。本研究有望为HER2阳性肿瘤，尤其是转移肿瘤的基因治疗和免疫治疗提供一种新途径。