中文摘要：

糖尿病肾病最终可导致肾小球硬化，后者主要表现为肾小球系膜细胞肥大和细胞外基质蛋白过量堆积。系膜细胞外基质蛋白表达增加的分子机制目前还不十分清楚，本课题主要研究在肾小球系膜细胞中Src激酶和caveolin-1是否参与TGFβ和VEGF诱导的RhoA/Rho激酶激活，并促进细胞外基质蛋白如纤连蛋白和I、IV型胶原蛋白的表达上调，提出TGFβ和VEGF可能通过一条新的信号途径参与系膜细胞外基质蛋白过量堆积，拓宽对糖尿病肾病肾小球硬化信号途径的认识。在此基础上进一步研究RhoA/Rho激酶的特异性抑制剂和caveolin-1关键区域缺失突变的腺病毒表达质粒转染能否抑制或减轻糖尿病肾病肾小球硬化的程度，确定新信号传导途径的重要性，为寻找防治糖尿病肾病的新策略奠定基础。

结论摘要：

糖尿病肾病最终可导致肾小球硬化，后者主要表现为肾小球系膜细胞肥大和细胞外基质蛋白过量堆积。系膜细胞外基质蛋白表达增加的分子机制目前还不十分清楚，本课题主要从TGFβ和VEGF的作用机制着手进行研究。结果显示TGFβ介导的RhoA/Rho激酶激活和细胞外基质蛋白表达增加依赖于caveolin-1 和Src激酶。VEGF诱导的系膜细胞外基质蛋白fibronectin表达上调呈现剂量依赖性和时间依赖性。进一步实验证实VEGF诱导了caveolin-1与VEGFII型受体KDR、Src激酶形成复合体；KDR介导Src激酶的活化，Src激酶再通过磷酸化caveolin-1和RhoA蛋白介导fibronectin的表达上调。这些结果说明Caveolae和caveolin-1参与了VEGF所诱导的RhoA/Rho激酶激活和系膜细胞外基质蛋白fibronectin表达上调。随后用含不同分子区域的caveolin-1真核表达质粒和caveolin-1突变质粒cav-1Y14A进行转染实验，进一步证实caveolin-1 N末端（特别是第14位酪氨酸）是发挥作用的重要分子区域。动物实验方面，建立了链脲佐菌素诱导的大鼠糖尿病长期模型（8个月），发现尽管VEGF I型受体和II型受体在糖尿病大鼠的肾皮质均上调，但只有II型受体KDR与caveolin-1形成的复合体在糖尿病大鼠的肾皮质出现上调，进一步证实了细胞实验的结果。在糖尿病肾病的不同时期给药，以血管紧张素转化酶抑制剂依那普利作为对照，实验结果证实Rho激酶特异性抑制剂法舒地尔能减轻肾小球硬化的程度，其治疗效果与依那普利相当，从而拓展了法舒地尔的临床应用领域。此外，用caveolin-1 N末端缺失突变的腺病毒表达质粒，感染大鼠肾组织，再建立糖尿病动物模型，实验结果证实caveolin-1N末端缺失突变能够抑制RhoA/Rho激酶的激活和纤连蛋白、胶原蛋白I、IV型的堆积，并延缓了糖尿病肾病肾小球硬化，说明了这一信号途径的重要性。综上所述，TGFβ和VEGF通过一条新的信号传导途径参与了糖尿病肾病肾小球系膜细胞外基质蛋白过量堆积，主要由caveolin-1和RhoA/Rho激酶介导，提示caveolin-1和RhoA/Rho激酶可作为糖尿病肾病治疗的新靶点，为糖尿病肾病的防治提供了一种新的策略。