中文摘要：

金黄色葡萄球菌（S.aureus）是奶牛乳房炎主要致病菌，由于耐药菌株大量出现，导致抗菌素疗效不佳。因此，使用疫苗预防S. aureus感染已成研究热点。以往研究的全菌灭活苗、荚膜多糖结合苗及单一成分蛋白亚单位苗免疫保护效果均不理想。根据S. aureus多因子致病特点和以往研究结果，最近提出使用多抗原成分疫苗有望解决这一问题。可目前缺乏对不同抗原成分免疫效果比较研究，影响抗原成分选择；且缺乏对3种以上抗原的多抗原疫苗免疫研究。本项目拟通过对S. aureus 4种表面粘附素类抗原、4种菌体结构蛋白类抗原进行免疫研究后，各选择1种免疫保护效果好的抗原，同α溶血素一起，进一步研究选取各抗原的免疫优势片段，经融合表达制备含3种不同抗原免疫优势片段的嵌合蛋白，并研究其免疫保护作用。为进一步研究预防奶牛乳房炎S. aureus与链球菌多抗原嵌合苗和人类S. aureus苗提供参考。

结论摘要：

金黄色葡萄球菌（S.aureus）不仅引起人类感染，也是奶牛乳房炎的主要致病菌。由于S.aureus耐药菌株大量出现和药物治疗造成奶中残留问题，用抗菌素防治S.aureus感染受到限制。因此，用疫苗预防S.aureus感染成研究热点。以往研究的全菌灭活苗、荚膜多糖结合苗及单成分亚单位苗免疫保护效果均不理想。根据S.aureus致病机理和已有研究结果，提出多抗原亚单位苗有望解决这一问题。但在众多抗原中选择哪些抗原、如何来构建多抗原疫苗尚需研究。本研究对S.aureus主要表面粘附素抗原ClfA、ClfB、FnbPA、Can和菌体蛋白抗原TRAP、IsdA、IsdB、GapC分别进行免疫原性比较研究，根据免疫小鼠攻毒、抗体水平及细胞因子水平检测结果，选择表面粘附素FnbpA和菌体蛋白Trap作为候选抗原，并与α溶血素（Hla）一起构建多抗原疫苗。同时，我们比较研究了IsdB免疫优势片段（tIsdB）与Trap的嵌合蛋白（tIsdB-Trap）、IsdB、Trap以及IsdB与Trap混合（tIsdB+Trap）的免疫保护效果，结果证明tIsdB-Trap嵌合蛋白免疫保护效果好于其他各组。因此，构建Trap、Hla和FnbpA嵌合蛋白。为确保Trap、Hla和FnbPA嵌合蛋白有效表达，对分子量较大的Hla和FnbPA免疫优势片段进行筛选。经生物信息学分析后，表达Hla毒性失活突变（HlaH35L）、Hla1-50aa、Hla5-76aa、Hla158-218aa和HlaD（Hla5-76aa与Hla158-218aa融合）片段，用小鼠肺炎模型证实HlaD免疫保护效果近于HlaH35L蛋白；表达FnbPA和FnbPA301-430aa、FnbPA801-874aa以及FL（FnbPA301-430aa与801-874aa融合）片段，用小鼠败血症模型证实，FL免疫保护效果近于FnbPA全蛋白。在此基础上，将Trap、HlaD和FL进行融合表达，并将该嵌合蛋白（TAF）免疫小鼠，并设Trap、HlaD、FL以及这三种蛋白混合对照组，通过免疫小鼠攻毒、血清抗体、调理吞噬、细胞因子（INF-γ、IL-4、IL-17等）检测等证实，多抗原嵌合蛋白TAF免疫保护效果好于其他各组，为深入研究预防S. aureus感染疫苗提供参考。