中文摘要：

中期因子（Midkine）是肝素结合生长因子家族的成员，它不仅是胎儿发育过程中的调节因子，还通过促有丝分裂、促血管生成、抗凋亡等功能参与肿瘤的发生、演进及转移过程。我们前期的工作显示Midkine与胃癌细胞的增殖和侵袭关系密切,并发现其可能通过调节miRNA-335的表达来调控胃癌细胞的增殖、运动及侵袭。我们应用生物信息学技术预测出6个miRNA-335可能的靶基因。然而miRNA-335通过哪个靶基因发挥作用，又是如何促癌细胞增殖及转移的尚不清楚。本研究将通过临床标本的检测，以及运用逆转录病毒系统及活体成像技术在体内外证实Midkine调节的miRNA-335抑制胃癌的增殖及侵袭转移，并应用荧光素酶报告基因检测，基因转染技术确定miRNA-335的靶基因并试图阐明其促进胃癌增殖及侵袭转移的可能分子机制，为寻找胃癌治疗的新靶点提供理论依据。

结论摘要：

我们首先研究了在体内环境下Midkine(MK)对胃癌转移的调控作用。利用肿瘤细胞裸鼠尾静脉注射实验，我们发现稳定低表达MK的SGC-7901细胞系形成的肺转移数目明显少于对照组。我们进一步在前期构建的稳定低表达MK的SGC-7901细胞系中利用Real-Time RT-PCR技术验证了MK表达下调能够使miR-335的表达明显升高。随后我们就miR-335在体内外对胃癌的增殖和侵袭转移方面的调控作用和调控机制进行了细致的研究。Real-Time RT-PCR结果显示四种人胃癌细胞系中（AGS, SGC-7901，BGC-823，MGC-803）miR-335 表达普遍降低。我们进一步收集了70 对胃癌组织和对应的非癌胃粘膜组织检测miR-335的表达情况，发现尽管miR-335在胃癌组织及对应的非癌胃粘膜组织中的表达无显著差异，但miR-335的相对表达与pT分期、pN分期以及淋巴结转移和淋巴管癌栓的发生明显负相关。利用Transwell 侵袭实验我们发现过表达miR-335能有效抑制SGC-7901和BGC-823细胞系的侵袭能力，而敲除内源性miR-335的表达能明显增强AGS细胞系的侵袭能力。为进一步探讨在体内环境下miR-335对胃癌转移的作用，我们将过表达miR-335的SGC-7901细胞系和对照细胞系分别进行了肿瘤细胞裸鼠尾静脉注射实验，发现注射了过表达miR-335的SGC-7901细胞系的裸鼠的肺转移形成能力明显减弱。利用生物信息学分析、双荧光素酶报告系统技术及Western Blot，我们证明了胃癌中SP1和Bcl-w是miR-335的靶基因并受其负向调控作用。同时，Transwell侵袭实验也证实了SP1和Bcl-w能够增强胃癌的侵袭能力。在本项目的研究中，我们证明了MK对于胃癌转移的正向调控作用，明确了在胃癌中MK对于miR-335表达的负向调控作用，证实了miR-335对于胃癌侵袭和转移的负向调控作用，找到了miRNA-335的靶基因SP1和Bcl-w,进而阐明了miR-335对于胃癌侵袭和转移的调控机制。这一系列的研究结果将为今后的胃癌治疗提供新的作用靶点。