中文摘要：

采用顺铂浓度持续递增联合大剂量间歇诱导法，建立喉癌多药耐药细胞系。从MDR1已知序列中设计4条含21个碱基的siRNA和阴性对照。通过预实验，由siRNA表达框架筛选出最佳siRNA系列, 并将其克隆到带有H1启动子的质粒中。用阳离子脂质体包裹质粒并将其转染到喉癌多药耐药细胞中。在mRNA和P-gp蛋白水平，用实时RT-PCR和流式细胞术等检测MDR1的转录后抑制效应；同时检测细胞系半数抑制浓度和

结论摘要：

目的建立耐紫杉醇人喉癌细胞系。构建表达MDR-1siRNA的慢病毒载体系统。使用该慢病毒逆转细胞系中MDR1介导的多药耐药。材料与方法体外诱导建立人喉鳞癌耐药细胞系。观察其药物敏感性、MDR1mRNA及P-GP蛋白等生物学特性。设计合成3条互补DNA链，插入慢病毒，包装病毒颗粒。以Western blot方法分别检测干扰效率。使用效率最佳的感染细胞系，通过TR-PCR、免疫组化及MTT等方法检测细胞MDR1mRNA、蛋白及药物敏感性等特性。结果细胞系在TAX培养基中稳定生长，其耐药性为原细胞系的12.31倍，倍增时间14.5小时，有裸鼠成瘤性，MDR1mRNA转录及P糖蛋白表达水平均明显增高。成功构建MDR1siRNA慢病毒，滴度>1×108TU/ml。第3条敲减效果最佳。使用其感染细胞系，发现MDR1mRNA、P糖蛋白水平明显且特异性下降，药物敏感性得到恢复。结论成功建立细胞系。成功建立表达MDR-1siRNA的慢病毒载体系统。表达MDR-1siRNA慢病毒载体系统可以持续降低MDR1的表达，恢复了喉癌耐药细胞系对于化疗药物的敏感性。