中文摘要：

膀胱癌是我国最常见的泌尿系恶性肿瘤，其主要特点是术后高复发率高，且有恶性程度增高的趋势，免疫逃避是导致复发的重要机制。树突状细胞（DC）是主要的抗原提呈细胞。程序性死亡配体是表达在DC等细胞上的抑制性共刺激分子，可通过影响DC提呈抗原激活T细胞的能力，参与膀胱肿瘤免疫逃避过程，且与BCG膀胱灌注等免疫治疗方法的失败有关。据此，我们拟首先通过制备小鼠骨髓来源的DC并负载膀胱肿瘤抗原，构建DC疫苗，再通过构建PD-L1腺病毒载体及siRNA，使DC疫苗PD-L1表达增高或降低，然后进行体外细胞实验以及肿瘤动物模型实验，研究PD-L1对DC功能的影响，揭示其参与膀胱肿瘤免疫逃避、影响疫苗疗效的机制，从而为获得一种新的膀胱肿瘤疫苗，找到预防膀胱肿瘤复发和进展的新途径奠定基础。

结论摘要：

膀胱肿瘤是我国最常见的泌尿系恶性肿瘤,免疫逃逸是导致膀胱肿瘤复发和进展的重要机制.树突状细胞(dendritic cell, DC)是目前已知的专职且功能最为强大的抗原递呈细胞,以DC为基础的肿瘤疫苗已经被广泛应用于恶性肿瘤治疗,如何增强DC疫苗的抗原提呈能力成为提高DC抗肿瘤疫苗效能的关键.程序性死亡配体1(PD-L1)是表达在DC等细胞上的抑制性共刺激分子,可通过影响DC提呈抗原激活T细胞的能力,参与膀胱肿瘤免疫逃逸过程.本课题的研究内容主要包括:探讨膀胱肿瘤患者外周血DC的表型及免疫功能变化;研究阻断PD-L1通路对其免疫功能的影响;研究PD-L1分子对小鼠DC免疫效应的影响,探讨其免疫调节机制及生物学意义;制备PD-L1沉默的DC疫苗,评价其对T细胞的活化功能及其诱导T细胞的特异性杀伤膀胱肿瘤细胞的作用.课题完成情况:1.完成膀胱肿瘤患者外周血DC表型和免疫功能的检测;2.通过阻断PD-L1通路,研究了膀胱肿瘤患者外周血DC免疫功能的变化;3.制备了小鼠的DC并负载肿瘤抗原,成功构建DC疫苗;4.构建并鉴定PD-L1siRNA,观察其对DC的PD-L1沉默效果;5.已验证DC疫苗诱导的CTL对体外培养的膀胱肿瘤细胞的生物学效应,对比分析PD-L1对DC疫苗免疫效应的影响.课题的主要研究成果和理论:1.膀胱肿瘤患者外周血DC免疫功能检测研究表明,膀胱肿瘤患者外周血源性DC高表达PD-L1.低表达CD83及过多分泌IL-10是膀胱肿瘤发生免疫逃逸的原因之一.2.阻断PD-L1通路可使膀胱肿瘤患者外周血DC的免疫话性增强,提示可尝试通过PD-L1通路调节膀胱肿瘤患者的免疫功能,为防治膀胱肿瘤复发提供新途径.3.小鼠骨髓来源单核细胞经过细胞因子GM-CSF.IL-4联合诱导分化,可成功获取成熟DC细胞;PD-L1siRNA能完全沉默DC细胞上PD-L1的表达,PD-L1沉默的DC进一步成熟,抗原提呈能力增强.4.负载膀胱癌MB49抗原的DC可以诱导产生特异性的抗膀胱癌免疫效应,而沉默PD-L1增强了DC介导的抗肿瘤免疫反应.本课题已按计划完成项目计划内容,目前已发表SCI收录论文1篇(IF1.7),国内统计源论文4篇,培养博士2名,硕士1名.较为全面的完成了课题的各项任务和研究目标.