中文摘要：

鲤春病毒血症病毒（SVCV）可以引起鲤科鱼类大规模暴发鲤春病毒血症，该病被国际兽疫局(OIE)列为必须申报的疾病之一。尽管我国目前还没有大面积爆发该病，但已有从金鱼、锦鲤等观赏鱼中分离鉴定出SVCV的相关报道，研制有效疫苗是该病防制的迫切需要。本研究将利用弹状病毒G蛋白细胞受体的广谱性，分别构建基于SVCV/G和水泡性口炎病毒VSV/G的假型杆状病毒，并在此基础上评价二者对多种鱼类细胞系的转导效率；然后分别插入草鱼出血热病毒（GCHV）VP6基因，构建表达VP6基因的两种假型杆状病毒(BV-SVCV/G-VP6和 BV-VSV/G-VP6），并通过草鱼、鲤鱼、青鱼等多种鱼类的SVCV和GCHV攻毒实验，验证二者的免疫保护效果，从而为SVC、GCH新型双价疫苗开发奠定基础。同时，本研究的实施，也将为在SVCV/G假型杆状病毒基础上开发鱼用多价疫苗开辟新思路。

结论摘要：

鲤春病毒血症病毒（SVCV）属于弹状病毒科水泡性病毒属中的一员,可以引起鲤科鱼类大规模暴发鲤春病毒血症(SVC)，该病被国际兽疫局(OIE)列为必须申报的疾病之一。尽管我国目前还没有大面积爆发该病，但已有从金鱼、锦鲤等观赏鱼中分离鉴定出SVCV的相关报道。囊膜糖蛋白（G）是SVCV最主要的免疫原性蛋白，是疫苗和诊断试剂研制的重要靶蛋白。在青年基金资助下，申请人课题组专注于SVCV的研究，基本完成了课题任务，取得的研究成果主要有以下几点（1）通过杆状病毒启动子改造和蛋白修饰，首次构建了能高效转导鱼类细胞系，并介导外源基因在鱼类细胞中持续、大量表达的重组杆状病毒；（2）初步探索了SVCV/G修饰的杆状病毒高效转导鱼类细胞的分子机制，发现SVCV/G能够介导昆虫细胞发生融合，并证明该蛋白展示在昆虫细胞膜上，在SVCV/G与水泡性口炎病毒VSV/G介导细胞融合的比较研究中发现，SVCV/G引起的细胞融合较VSV/G严重；(3)成功构建了含有草鱼呼肠孤病毒（GCHV）VP6蛋白的重组杆状病毒，间接免疫荧光和免疫印迹实验证明该蛋白可以在昆虫细胞和鱼类细胞中获得表达；（4）对重组杆状病毒的免疫效果进行了评价，发现该疫苗可以产生中和抗体，用荧光定量PCR 法检测了免疫草鱼肝脏和肾脏中的免疫相关基因IFN I、IL-10、Mx和IRF-7的表达情况，结果表明，IFN I 、IRF-7和Mx在肝脏和脾脏中的表达量在免疫21d后达到最高，而IL-10在免疫14d的草鱼脾脏中表达量达到最高，表明该重组疫苗可以刺激免疫相关基因的表达。综上所述，杆状病毒可以作为一种比较好的鱼用疫苗载体，在鱼类疾病疫苗研究中具有广阔的应用前景。