中文摘要：

IHHNV是世界各地养殖和野生对虾中一种重要的病毒性病原，但对其编码基因的功能目前仍不清楚。我们前期研究发现，IHHNV非结构蛋白NS1定位于细胞核中，导致细胞死亡，呈现凋亡细胞的特征，由此推测IHHNV NS1可能具有诱导细胞凋亡的功能。为此，本项目拟利用荧光显微技术实时观察NS1蛋白在细胞核内的精确定位及动态变化；重点采用四环素诱导表达系统对NS1基因进行诱导表达，通过Hoechst染色、流式细胞术和TUNEL等方法研究NS1蛋白诱导细胞凋亡的功能；进一步，利用Caspase系列检测试剂盒等检测启动凋亡发生的信号通路和具体分子机制，并利用定点突变技术查明NS1蛋白序列中对诱导凋亡所必需的功能结构域。通过本项目研究，不仅可以阐明IHHNV NS1与细胞凋亡之间的关系，而且为IHHNV 的分子生物学研究积累重要数据，有助于揭示IHHNV的致病机理和病理发生等基础理论问题。

结论摘要：

传染性皮下及造血组织坏死病毒（Infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus, IHHNV）是危害世界各地对虾养殖的重要病毒性病原之一， 隶属于无脊椎动物细小病毒；虽已有不同IHHNV分离株的基因组全序列被破译，但对其编码基因的功能、尤其是它们在感染、复制周期以及致病过程中的生物学功能仍不清楚。本项目是首次研究无脊椎动物病毒IHHNV非结构蛋白NS1在诱导细胞凋亡方面的功能。通过本项目研究发现，IHHNV NS1蛋白定位于鱼类细胞的细胞核内，并不随着转染时间而发生转移；重要的是，本项目通过Hoechst染色、流式细胞术、TUNEL和Caspase活性检测等一系列方法证实了IHHNV NS1的表达能诱导鱼类细胞凋亡发生，其特征包括有细胞核片段化， Caspase-3和caspase-9分子的激活等； 其机制是通过激活NF-κB 和NFAT两种核转录因子，导致细胞线粒体膜电势降低，进而通过线粒体途径介导细胞凋亡发生；进一步，本项目还利用定点突变技术鉴定出IHHNV NS1蛋白核苷酸结合区中的Gly489, Gly494, Lys495, Glu534和Glu535对其诱导鱼类细胞凋亡是必须的。因此，通过本项目研究不仅阐明了IHHNV NS1诱导细胞凋亡的分子机制，而且为IHHNV 的分子生物学研究积累了重要数据，也为揭示IHHNV的致病机理和病理发生等基础理论问题奠定基础。