中文摘要：

胰腺癌化疗耐药性是胰腺癌预后差的主要原因,肿瘤干细胞与肿瘤耐药的相关性引起人们的高度关注, 胰腺癌干细胞2007年被首次鉴定并验证具有化疗药物高度耐药性。经过上皮间质转化（EMT）/β-catenin核内转移的胰腺癌化疗耐药细胞，呈现干细胞表型。而且低氧微环境既是诱导EMT发生的刺激因素也是维持肿瘤干细胞特性和生存的主要条件，因此我们认为低氧微环境通过激活EMT/β-catenin核内转移，诱导胰腺癌细胞转化成胰腺癌干细胞并维持干细胞的自我更新，引起胰腺癌的化疗耐药。且相关研究发现hyperoxia条件下肿瘤细胞能够进行间质上皮转化，逆转和阻滞EMT的发生，因此我们设想:应用基因技术干扰β-catenin表达联合hyperoxia处理，双重阻遏EMT/β-catenin核内转移，减少胰腺癌干细胞的形成和自我更新，靶向胰腺癌干细胞，改善胰腺癌化疗药物耐药，为胰腺癌治疗提供临床和基础的科学依据

结论摘要：

EMT在胰腺癌耐药和转移中扮演重要角色，了解EMT过程中代谢（如葡萄糖、氨基酸）的变化，细胞膜上各种代谢通道的改变，以及细胞中线粒体的改变，是针对EMT进行胰腺癌治疗的一种关键方法，因此，在此设想的基础上我们应用TGF-β诱导胰腺癌细胞进行EMT变化，测定了EMT前后线粒体膜电位以及线粒体中活性氧和线粒体DNA拷贝数的变化。结果显示应用TGF诱导胰腺癌细胞发生了EMT中， EMT后的胰腺癌细胞DNA拷贝数明显增加，胰腺癌细胞的线粒体数目有增长趋势，而线粒体的膜电位明显降低，导致胰腺癌细胞内ROS明显增多。这些结果说明胰腺癌细胞在进行EMT时，伴有线粒体功能和数量的变化。纠正线粒体的变化，可能改善胰腺癌化疗效果。DKK 3是Wnt／β-catenin信号通路拮抗剂，我们通过慢病毒建立DKK3过表达细胞并以CoCl2 100uM（模拟低氧环境）下观察对胰腺癌细胞EMT和干细胞形成的影响，进一步了解对肿瘤细胞化疗的效果。结果显示DKK3抑制低氧刺激的EMT形成，抑制了β-catenin的转录效果，降低β-catenin下游基因的表达和干细胞标记物OCT4的表达，并且流式细胞分析显示DKK3抑制了肿瘤干细胞的形成，表现为CD133+细胞显著下降。DKK3降低了吉西他滨治疗胰腺癌的IC50值，增加吉西他滨诱导胰腺癌细胞的凋亡率。Sirt1编码的蛋白是组蛋白去乙酰化酶家族中的一员, 参与细胞的增殖、分化、衰老和凋亡。sirt1抑制缺氧情况下氧化应激诱导的细胞凋亡和衰老,促进肿瘤细胞形成和生长，并诱导肿瘤EMT而导致肿瘤的转移。因此我们首次探讨抑制Sirt1是否能够改善胰腺癌的化疗敏感性，结果显示抑制Sirt1可以增强吉西他滨治疗胰腺癌的疗效。