中文摘要：

目前以手术为主辅以放、化疗等综合治疗措施的实施在一定程度上提高了喉癌患者的生存率，但总体上病变复发与转移的控制仍不尽如人意。因此探索新的治疗模式并阐明其机制对提高喉癌疗效具有重要的现实意义。本课题拟联合卡铂与光动力疗法治疗AMC-HN-3人喉鳞癌细胞，进行两个方面的探讨一是联合治疗是否有增强喉癌细胞凋亡诱导与转移相关生物学行为抑制的协同效应；二是探讨这种协同效应的内在机制。前期体外研究初步表明联合治疗组诱导了增强的细胞毒性与凋亡。接下来本课题将1检测线粒体激活、内质网压力诱导等探讨联合治疗可能涉及的凋亡信号通路；2检测细胞迁徙运动、黏附侵袭能力等探讨联合治疗对细胞转移相关生物学行为的影响；3检测卡铂预处理对喉癌细胞光敏剂吸收及活性氧产生的影响，阐明联合治疗诱导协同效应的上游机制；4验证这一联合模式的在体抗癌疗效，揭示其可能机制。本研究将为临床喉癌的微创与综合治疗提供新的思路与途径。

结论摘要：

本课题通过联合卡铂与光动力疗法体外/在体治疗人喉鳞癌，探讨联合治疗模式较单剂治疗是否可以获得更强的凋亡诱导和肿瘤转移相关生物学行为抑制，并对可能涉及的信号通路及其上游机制进行探讨。课题进一步验证了联合治疗模式对喉鳞癌细胞协同的细胞毒性及凋亡诱导效果，阐明了具体的凋亡信号通路，即联合治疗组通过协同激活线粒及诱导内质网压力等通路诱导喉癌细胞凋亡。通过实验（细胞划痕及迁徙实验、蛋白质表达等检测）我们还观察到，联合治疗组对喉鳞癌细胞转移相关生物学行为抑制的协同增强的效应。研究还发现卡铂与光动力疗法联合是通过抑制喉鳞癌细胞ERK/MEK信号通路的磷酸化，下调MMP-2/9及EGFR表达进而抑制其转移相关生物学行为（见成果论著1）。为明确卡铂联合光动力疗法协同诱导喉鳞癌细胞凋亡与转移相关生物学行为抑制的上游机制，引入活性氧生成调控实验。结果显示卡铂预处理显著增加了9-HPbD-PDT诱导人喉鳞癌细胞的凋亡诱导；阻滞活性氧生成（GSH）联合组凋亡诱导减少、EGFR表达上调、细胞迁徙活性增强；增强活性氧生成(H2O2)联合组凋亡诱导增加、EGFR表达下调、细胞迁徙活性减弱；均提示协同激发的活性氧生成在联合治疗协同作用中的上游导向性作用。卡铂联合光动力疗法是否还通过增加喉鳞癌细胞光敏剂吸收进而增强光动力治疗的光化学效果呢？本实验还探讨了卡铂预处理对喉鳞癌细胞摄取光敏剂影响。免疫荧光实验结果表明，在联合治疗模式中卡铂预处理没有明显改变喉鳞癌细胞对9-HPbD的吸收。 因此，进一步认为协同诱导的活性氧生成在联合治疗诱导人喉鳞癌细胞凋亡及迁徙抑制中起上游决定性作用。为明确卡铂与光动力疗法联合对人喉鳞癌细胞移植瘤的疗效与可能机制。对荷瘤鼠进行卡铂、PDT及卡铂+PDT分组治疗。随访30天，联合组显示出较单剂组显著增加的肿瘤抑制率。然而，在凋亡诱导方面，在体联合治疗并没有显示出如体外治疗凋亡协同诱导的特点。这可能与在体治疗与体外治疗肿瘤细胞死亡形式不同有关。卡铂联合光动力疗法对喉鳞癌细胞细胞毒性、凋亡诱导及迁徙转移抑制等协同增强效果的进一步证实，其潜在凋亡信号通路与迁徙转移侵袭性抑制的相关通路的证实及活性氧协同生成作为上游机制的发现与证实，为发掘临床上喉癌微创治疗与综合治疗的新途径提供了全新的理论基础。