中文摘要：

本项研究利用PCR 技术从巴氏杆菌敏感株和耐药株中扩增出相关耐药基因，在基因克隆及同源性分析的基础上，将基因片段进行原核表达，并对蛋白表达相对含量进行检测；将扩增出的耐药基因导入敏感大肠杆菌株中，人工构建耐药模型，考察耐药性的诱导变化情况及其耐药水平与耐药基因突变的相关性，进而明确由质粒介导的耐药基因突变在巴氏杆菌耐药机制中所起的作用；利用分子生物学和基因芯片技术定位巴氏杆菌耐药基因和基因突变位点，研制用于巴氏杆菌耐药性检测的基因芯片，使其能够快速、准确、高效地针对巴氏杆菌对多种药物产生的耐药性进行检测和筛选,在一次反应中进行多种信息的平行分析。由于该技术在巴氏杆菌耐药性检测过程中优越于传统的药理学检测技术。因此该项研究有着重要的应用价值和广阔的发展前景。

结论摘要：

利用 PCR 技术从巴氏杆菌中扩增出相关耐药基因，对上述基因同源性分析中发现所有链霉素耐药株StrA基因在第204位核苷酸处存在突变，而高耐药株除在204位突变外还于793位出现突变；磺胺耐药株Su1II基因在第159,246,384,584,590,591, 597，582位核苷酸处存在突变，而高耐药株除上述位点突变外还在592位出现突变。氯霉素耐药基因CatB2于3596位和四环素耐药基因TetG于3102位和3125位发生突变。正是上述基因位点的变异，导致菌体内抗菌药物结合靶位发生改变，细菌可通过靶位的改变，使抗菌药不易与之结合而产生耐药性。为实现巴氏杆菌耐药性高通量、并行化、自动化的快速检测，本课题从巴氏杆菌临床耐药株中扩增并荧光标记包含磺胺耐药基因sulI、sulII、链霉素耐药基因strA、strBy、氯霉素耐药基因CatB2和四环素耐药基因TetG多态性位点和突变位点的基因序列，设计特异性探针，构建耐药基因检测芯片，实现了6种耐药基因及2个突变基因的同时检测。利用该芯片对耐药菌株的检测结果与药敏检测结果完全一致。本研究将为兽医临床常见病原菌耐药性检测芯片的研发奠定基础。