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骨髓基质干细胞向视网膜神经节样细胞分化中支配基因筛选及其研究
  • 项目名称:骨髓基质干细胞向视网膜神经节样细胞分化中支配基因筛选及其研究
  • 项目类别:面上项目
  • 批准号:30471845
  • 申请代码:H1205
  • 项目来源:国家自然科学基金
  • 研究期限:2005-01-01-2007-12-31
  • 项目负责人:苏冠方
  • 负责人职称:教授
  • 依托单位:吉林大学
  • 批准年度:2004
中文摘要:

以大鼠作为实验动物,通过诱导剂与视网膜细胞条件分化液诱导骨髓基质干细胞(BMSCs)向视网膜神经节样细胞分化。经免疫组织化学方法证实已分化为目的细胞后,收集自BMSCs始至分化为视网膜神经节样细胞之间各阶段细胞。同时收集体外培养的大鼠原代视网膜神经节细胞(RGCs)。用分子筛、离子交换柱分离出上述几组细胞内的总蛋白,获取不同分子量、不同pH值蛋白质组份。用具有不同化学修饰表面的蛋白芯片与上述蛋白质结合,同时行双向电泳,获得差异性蛋白。选取可做为BMSCs向视网膜神经节样细胞分化不同阶段的特异性蛋白质及与成熟RGCs相同的表达蛋白质,经质谱分析确认其氨基酸序列,并推导出其基因结构进行分析。从而发现在上述细胞分化过程中的标志蛋白及其编码基因,为探讨应用转基因技术诱导BMSCs向视网膜神经节样细胞定向分化,并将其应用于眼科临床奠定坚实的理论及前期工作基础。

结论摘要:

骨髓间充质干细胞(BMSCs)是骨髓中除造血干细胞以外的另一类干细胞,具有多向分化潜能。在眼科领域,由BMSCs诱导成视网膜光感受器样细胞的成功,提示BMSCs向视网膜神经节细胞的诱导具有可能性,为本文提供了理论依据。我们进行了以下几方面工作1、利用乳鼠视网膜细胞诱导BMSCs,诱导后细胞经鉴定为视网膜神经节样细胞。2、利用SELDI蛋白芯片技术检测了BMSCs、诱导后的视网膜神经节样细胞及原代培养的视网膜神经节细胞(RGCs)的蛋白质谱。发现有10个标志分子在诱导后的视网膜神经节样细胞及原代视网膜神经节细胞中同时增高,表明诱导后的视网膜神经节样细胞距成熟的RGCs仅有少部分差异。3、利用膜片钳技术记录大鼠BMSCs、诱导后视网膜神经节样细胞及原代视网膜神经节细胞的离子通道,发现诱导后的视网膜神经节样细胞可能是BMSCs由前体细胞向RGCs这一终点转化过程中细胞由未成熟逐步迈向成熟的一个途径。4、利用抑制消减杂交技术筛选骨髓间充质干细胞诱导分化前后差异表达基因,筛选出的差异基因有可能是BMSCs向视网膜神经节样细胞分化过程中起支配作用的基因。


成果综合统计
成果类型
数量
  • 期刊论文
  • 会议论文
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