中文摘要：

吉非替尼是目前非小细胞肺癌靶向治疗有力武器之一，但是多数患者在使用吉非替尼8-10个月后会产生对吉非替尼耐药，如何延迟，甚至逆转这种耐药的产生一直是临床工作中的难点，我们的前期研究发现雌激素受体的拮抗剂可以调节肺癌细胞对吉非替尼的敏感性同时伴随细胞内miR-let-7c发生了明显的上调，但其机制尚不清楚，结合生物信息学及国内外文献报道，我们推测miR-let-7c可能通过作用于以RAS为代表的靶基因从而抑制PI3K/Akt及MEK/ERK通路的激活起到调节吉非替昵敏感性的作用，本课题拟应用基因芯片及荧光素酶报告系统确认包括RAS在内的miR-let-7c下游参与调控PI3K/Akt及MEK/ERK通路的靶基因，并从细胞及模式动物水平研究它们对以上通路的调控作用。该项目的完成将使我们深入的了解雌激素受体阻滞剂调节肺癌细胞对吉非替尼敏感性的分子机制，更为临床的应用提供了实验基础。

结论摘要：

非小细胞肺癌对EGFR-TKI的耐药一直是影响非小细胞肺癌治疗效果的主要瓶颈之一，除了EGFR外显子的突变状态以外，其它参与耐药的机制知之甚少。在本研中我们首先发现氟维司琼可以通过上调肺腺癌细胞H1975细胞中let-7的表达水平从而提高肺腺癌细胞H1975对吉非替尼的敏感性，进一步的下游机制研究提示let-7通过抑制RAS蛋白的表达，从而降低PI3K/AKT ，MEK/ERK信号通路的活性从而提高肺腺癌细胞H1975对吉非替尼的敏感性。总之，我们的第一部分研究发现let-7在氟维司琼诱导的提高吉非替尼的敏感性中发挥了重要的作用。在第二部分的在研究中，我们发现miR-21可以通过靶向PTEN蛋白的表达从而促进非小细胞肺癌的肿瘤形成。对47例非小细胞肺癌患者的Kaplan-Meier生存分析发现在miR-21高/PTEN低表达的患者的无病生存时间要显著的短于miR-21低/PTEN高表达的患者。在别外的46例使用EGFR-TKI治疗的非小细胞肺癌的肿瘤组织中的检测结果提示miR-21高/PTEN低表达也能预示着比较差的EGFR-TKI疗效及较短的总生存时间。体外分子试验我们发现miR-21可以明显降低pc-9对吉非替尼的敏感性，而在转染miR-21的基础上再转染PTEN过表达的质粒则可以逆转这种药物敏感性的变化；miR-21 inhibitor可以明显提高pc-9/GR对吉非替尼的敏感性，而在转miR-21 inhibitor的基础上再转染PTEN siRNA则可以逆转这种药物敏感性的变化。其共同的分子机制是miR-21通过靶向下调PTEN蛋白的表达，从而激活P-AKT及P-ERK信号通路从而下降NSCLC细胞对EGFR-TKI药物的敏感性。模式动物实验结果显示在稳定低表达miR-21的组裸鼠组，吉非替尼可以明显的抑制皮下移植瘤的的生长,低表达miR-21可以在动物水平提高pc-9/GR对吉非替尼的敏感性。通过本研究，我们发现了miR-21/Pten表达异常是导致非小细胞肺癌对EGFR-TKI耐药的另一个机制。我们的发现将为以miR-21/Pten表达异常作为作为切入点研究克服吉非替尼耐药策略提供实验基础。