"脾主运化"内涵较广,包括了现代医学的多个生理系统功能,其中胰腺分泌胰酶的消化作用是其重要内容之一。既往"脾不主运"的研究多从胰腺的外分泌功能探讨了其内涵,结果也提示胰腺腺泡细胞的损伤导致其分泌胰酶的外分泌功能降低是脾失健运的重要病理机制之一。而本研究则基于胰星状细胞(PSCs)的活化是胰腺纤维化形成的中心事件,采用改良植块法与酶消化法结合培养原代PSCs,通过建立胰腺纤维化研究的体外细胞模型,观察健脾化湿法对活化PSCs的增值、细胞骨架蛋白、细胞周期及纤维化相关的信号转导通路的调控和干预作用,拟从分子水平揭示运脾法抗胰腺纤维化的作用机制,并进一步从新的视角阐明"胰腺PSCs的活化增殖及纤维化相关的信号转导通路的激活也是'脾不主运'的科学内涵之一",以推动和丰富中医关于脾的病机学研究。
Regulatory function of activat;Serum pharmacology of Chinese;Pancreatic stellate cell;Pancreatic fibrosis;Cell signal transduction
中医“脾”,为气血生化之源,气机升降之枢,是人体生命活动的重要源泉,其内涵是包括了胰在内的,以消化为主,涉及免疫、神经、内分泌、血液等多系统、多功能的综合单位,其中“脾主运化”为其最重要、最基本的功能之一。既往“脾主运化”的研究多从胰腺的外分泌功能探讨了其学术内涵,结果也提示胰腺腺泡细胞的损伤导致其分泌胰酶的外分泌功能降低是脾失健运的重要病理机制之一。而胰腺除了腺泡细胞外,其重要的细胞组份还包括有胰星状细胞(PSCs)、导管上皮细胞、胰岛细胞、微血管内皮细胞以及胰腺干细胞等,故能否从其他细胞组份的生理病理入手来探讨“脾主运化”的内涵同样具有重要意义。本研究基于“胰星状细胞的活化是胰腺纤维化形成的中心事件”,采用改良植块法与酶消化法结合,成功培养了原代胰星状细胞;通过对所培养细胞的形态学、自发荧光、脂肪滴的观察以及对细胞骨架蛋白标志物ɑ-SMA免疫化学/荧光染色的检测,鉴定证实了所培养的细胞为活化的目的细胞;并以传代为重要手段,成功建立了胰腺纤维化关联的体外细胞模型。通过血清药理学原理,采用MTT比色法,观察了运脾法及其代表方药加减柴芍六君子汤含药血清、卡莫司他药物血清及空白血清对小鼠胰星状细胞活化增殖影响,结果提示不同浓度的加减柴芍六君子汤含药血清均能够有效抑制小鼠胰星状细胞的活化增殖,10%为其最佳药物效应浓度;并进一步观察了该浓度药物血清对胰腺纤维化关联的相关信号通路的影响,结果也提示10%的加减柴芍六君子汤含药血清能够有效抑制小鼠胰星状细胞分泌表达TGF-βl,从而从分子水平揭示了运脾法调控TGF-βl信号转导通路影响小鼠胰腺星状细胞的活化增殖是其抗胰腺纤维化的作用途径之一,这也进一步证实了“胰腺PSCs的活化增殖及纤维化相关信号转导通路的激活是中医脾不主运的科学内涵之一”,推动和丰富了中医关于脾的病机学研究。