中文摘要：

胆道闭锁危害巨大，病因未明。课题组利用基因芯片发现胆道闭锁肝组织促炎基因表达增加，其中MHCⅡ介导的外源性抗原呈递及由此导致的免疫反应与胆道闭锁密切相关，且涉及到NF-κB通路。通过基因间作用网络发现亮氨酸拉链癌下调因子1（LDOC1）可能在胆道闭锁发病中具有重要作用。因LDOC1可调节NF-κB通路，且具有SH3结构域，可介导磷酸化的酪氨酸残基与效应蛋白的结合，传递并放大级联效应。故LDOC1可能通过NF-κB通路调控胆道闭锁中的凋亡及炎症反应。因此我们拟研究（1）LDOC1在胆道闭锁患儿胆道中的表达变化（2）胆道闭锁LDOC1基因是否存在有意突变（3）LDOC1是否通过NF-κB通路影响胆道上皮凋亡及T淋巴细胞炎症反应（4）小鼠胆道闭锁是否与LDOC1有关。本研究将从整体、组织和细胞水平，较全面地了解LDOC1在胆道闭锁发病中的作用。研究结果可能对胆道闭锁的防治提供更多有价值的信息。

结论摘要：

背景与目标胆道闭锁是小儿常见梗阻性黄疸的原因之一,其病因不明。本研究利用基因芯片技术及生物信息学方法对胆道闭锁的基因表达谱进行研究，以期发现胆道闭锁发病中的关键调控基因，并对该基因的表达及功能进行研究。方法 提取胆道闭锁组及胆总管囊肿组肝脏组织的总RNA，利用基因表达谱芯片研究胆道闭锁及胆总管囊肿肝脏组织基因表达谱间的差异，并构建基因间相互作用网络，寻找在胆道闭锁发病过程中的关键调控基因。并对其在胆道闭锁中的表达情况进行研究。利用基因转染的方法在胆道上皮细胞及T淋巴细胞系中分别研究关键基因的对凋亡及炎症反应的影响。利用腺病毒转染的方法在胆道闭锁小鼠模型中研究该调控该基因表达对胆道闭锁发病的影响。结果 胆道闭锁与胆总管囊肿相比存在1000余条差异基因，通过基因调控网络构建发现LDOC1基因可能在胆道闭锁发病中起关键调控作用。Real-time PCR法发现与对照组相比胆道闭锁中LDOC1基因表达明显升高（p<0.05）。在T淋巴细胞系中转染LDOC1组较阴性转染组，LDOC1蛋白表达明显升高，转染LDOC1组较阴性转染组，在静息状态下在炎症因子产生上并无明显差异，但在经PMA刺激后，LDOC1组较阴性转染组TNF-α、IL-2、IFN-γ的表达均明显升高(p<0.05)。在胆道上皮细胞系中，通过凋亡检测，我们发现LDOC1转染组凋亡率显著低于MOCK组以及对照组。为了进一步研究LDOC1在整体水平对胆道闭锁发病的影响，我们构建以腺病毒为载体的pAd-siLDOC1,转染入新生Bab/c小鼠构建胆道闭锁小鼠模型。腹腔注射腺病毒载体后可以有效抑制LDOC1基因表达。同时通过对小鼠模型成模率研究发现，LDOC1干扰组胆道闭锁发病率为（10/25）较MOCK组（15/25）和RRV组（17/25）明显下降，并且LDOC1干扰组的肝脏损害情况（TB/SB，ALT/AST）较MOCK组和RRV组减轻（p<0.05），同时经检测LDOC1干扰组TNF-α、IL-2、IFN-γ表达较MOCK组和RRV组降低，而胆道上皮的凋亡增加,从而减轻异常的肝内毛细胆管增生及局部免疫炎症。结论LDOC1基因通过对炎症反应的调控及细胞凋亡的影响在胆道闭锁发病过程中起到十分重要的作用。而下调LDOC1可能对胆道闭锁的发病产生积极影响，这一发现将为胆道闭锁的防治提供新的思路和可能的靶点。