本项目以我们现有的工作为基础,瞄准噬菌体抗体库技术在我国鸡病的免疫诊断和免疫防治中的应用价值,拟准备以牛血清白蛋白为抗原免疫产蛋母鸡,建立保证获取鸡免疫球蛋白全套可变区基因的操作规程;在体外探索鸡单链抗体与噬菌粒高效连接和连接产物高效转化的方法;建立特异性鸡单链抗体基因的固相淘选法;观察特异性鸡单链抗体在原核系统中的表达效果。本研究将与鸡病免疫防治的三个方面紧密联系在一起,包括鸡寄生虫的诊断和疫苗研究、鸡病的商业化诊断试剂开发以及药物的靶向治疗。本研究的成功将为进一步制备各种特异性鸡源抗体提供一种方法,将应用于快速、简便、准确、廉价的鸡病免疫诊断试剂盒与高效、特异、廉价的免疫防治制剂的研究和开发工作中。因此,本项目具有潜在的应用价值。
抗体工程经历了多克隆抗体、单克隆抗体的发展,现已发展到了基因工程抗体阶段。鸡源性抗体的研究也随着抗体工程的发展进入到新的发展时期,鸡源性免疫抗体库的构建及特异性鸡单链抗体的筛选和表达与鸡病的诊断和疫苗的研究以及药物的靶向治疗相关。本课题以灭活的鸡新城疫病毒F48E8株为抗原免疫产蛋母鸡,开展了① 建立保证获得鸡免疫球蛋白可变区基因的操作规程;②在体外探索鸡单链抗体基因与噬菌粒高效连接和连接产物高效转化的方法;③建立特异性鸡单链抗体基因的固相淘选法;④探索特异性鸡单链抗体在原核系统中的表达效果。目前,已经建立了鸡源性免疫抗体库的构建方法,抗体库的库容可以达2×107,筛选到一个抗鸡新城疫病毒F48E8的基因工程单链抗体基因(Genbank登录号EF362802),在原核系统中表达出了抗鸡新城疫病毒F48E8的鸡源单链抗体。本课题为开展各种鸡源性免疫单链抗体库的构建提供了一种方法,对筛选特异性鸡单链抗体基因及其原核表达也有一定的借鉴,进一步阐明了制备鸡源性单链抗体可行性,将有助于探索各种鸡源性基因工程抗体及其片段。