本项目拟用分子生物学方法,模拟骨骺干细胞稳定性生长所需要的微环境。选择骨骺细胞分化稳定性的重要调控因子PTHrP提取G C细胞中的PTHrPmRN经逆转录成cDNA,并重组为PTHrP质粒 ,转染入骨骺干细胞,使其在骨骺干细胞中稳定表达,以期利用PTHrP 抑分化、防凋亡的生物学特性,制造出相对永生化的骨骺干细胞,为更深刻的揭示骨骺干细胞分化规律,人为调控骨骺干细胞的分化奠定坚实基础。
研究背景在骨骺周围的软骨膜中有一种成体干细胞,这种细胞对出生后骨的生长有重要意义。研究方向模拟骨骺干细胞稳定性生长所需要的微环境。选择骨骺细胞分化稳定性的重要调控因子PTHrP ,研究PTHrP在骨骺干细胞分化过程中的作用。主要内容1.鼠骨骺增殖区细胞的分离鉴定和克隆构建PTHrP基因真核表达载体;2.PTHrP重组质粒转染骨骺干细胞;3.骨骺干细胞的体外培养及生长特性;4.Notch1信号系统对骨骺干细胞增殖与分化调控作用的初步观察;5.激活的Notch1信号系统抑制前软骨干细胞凋亡及其机制研究;6.正弦波电磁场对鼠骨骺干细胞分化的生物学影响。重要成果分离鉴定鼠骨骺增殖区细胞,克隆构建PTHrP基因真核表达载体并转染骨骺干细胞;进一步研究出Notch1和PTHrP双信号系统对骨骺干细胞增殖与分化调控作用。科学意义本课题的研究证实激活Notch协同PTHrP促进骨骺干细胞增殖、抑制骨骺干细胞分化,其中Notch信号是横向调节,PTHrP是纵向调节,两者介导转录调控因子AP-1呈立体调节模式。