肺腺癌发病机制不明。细胞膜在肿瘤发生、发展过程中起重要作用。迄今,关于肺腺癌组织细胞膜蛋白质组学的研究尚未见报道。本课题拟应用激光捕获显微切割方法纯化肺腺癌及配对的正常肺组织细胞; 应用蔗糖梯度密度离心方法获得肺腺癌细胞膜,提取细胞膜蛋白质 应用iTRAQ分别标记肺癌组及正常组蛋白/肽;应用LC-MS/MS鉴定差异蛋白;结合文献及UniProt KB (http://www.uniprot.org/)数据库以及GO注释查询,应用生物信息学方法筛选(旨发现和肿瘤发生、发展密切相关的蛋白质)其中表达差异>1.5倍的功能不明的1-2种蛋白质进行研究;应用免疫组化、Western-blot、RT-PCR分别检测(验证)肺腺癌组织以及肺腺癌细胞系上述蛋白及其mRNA水平并结合临床资料进行分析,以其找到肺癌的病理标记物;选取前期验证的意义比较大的蛋白,然后应用RNAi技术及MTT法等进行目标蛋白功能的初步研究; 结合KEGG及PID信号通路数据库,应用RNAi技术、Western-blot、RT-PCR法进行目标蛋白信号传导通路研究。旨在阐明肺腺癌发病分子机制、获得有价值的肺癌早期诊断标志物。
英文主题词Lung adenocarcinoma;iTRAQ;mass spectrometry;Membrane protein;Differential proteomics