复杂环境样品中的微量/痕量成分分析涉及采样、运输、储存、萃取、浓缩、分离精制以及仪器检测和定性定量等多种技术。其中,分离精制技术是整个过程的瓶颈。目前主要采用的分离精制技术有吸附层析色谱法、尺寸排阻色谱法、高效液相制备色谱法等。但这些方法还不能满足现代分析化学中的快速、简便、自动化等样品前处理要求。针对这些问题,我们课题组在样品前处理中尝试了电泳分离/微富集联用技术。本课题将主要研究电泳分离和液相微富集联用技术,具体研究内容有①研究"电泳桥"分离技术;②设计与制作电泳分离和液相微富集联用装置;③优化电泳分离和液相微富集联用技术的工作条件;④基于以上结果,对植物和生物样品中的痕量有机物进行富集与检测。本课题着眼于当前复杂样品分析中最活跃的前沿研究领域-样品前处理技术,开展具有重要应用背景的应用基础研究,研究成果将在长白山环境保护开发与植物资源研究方面起技术支撑作用。
synergistic effect;multi-component;electrophoretic separation;affinity chromatography;component screening
现代的药理学和药物开发的基础是以”单组分,单靶点“为基础而构成的,以点对点模式强调了药物治疗的一个专一性。但是,对于我国的传统中药来说其作用机理是多个活性化学组分同时对机体产生作用时其产生的生物学作用强度远超过单独使用的总和。我们称这种多个活性组分或非活性组分的共同作用于机体获得生物作用强度远高于单独组分的单独使用的总和的作用称之为协同作用。为了进一步对协同作用的机理进行研究,必然得将这些活性成分筛选出来,但是众所周知中草药的成分复杂,其中起协同作用的成分只有部分已知,更多的是未知。传统的筛选方法如亲和色谱法、尺寸排阻色谱法、高效液相色谱法等有着非常致命的缺点,对于分离出来的化学组分无法确认是否对目标物有生物学作用和组分之间是否存在协同作用,为了确定其生物学作用后续需要大量的生物学实验,大大增加了研究工作的工作量和难度,因此开发一种能够快速、高效、简便的筛选具有协同作用的组分的方法。针对以上问题我们课题组在筛选方法中尝试将电泳分离技术和亲和色谱技术相结合,开发一种可以快速快速、高效、简便的筛选具有协同作用活性组分的技术。主要研究内容有1.研究”电泳桥“分离技术;2.设计与制作多室电泳分离装置;3.优化多室电泳分离系统的工作条件;4.基于以上结果,筛选中草药样品中对特定目标具有协同作用的活性组分;5.通过酶活性实验来研究活性组分的协同作用机理。本课题组已经成功的制备了结合电泳分离和亲和色谱技术优点的多室电泳分离装置,对其工作条件进行了优化确定了最佳的工作条件。以治疗糖尿病为目的从中草药北五味子中筛选出了七种潜在的抑制α-葡萄糖苷酶的抑制剂,分别为戈米辛D、五味子醇甲、五味子醇乙、巴豆酰戈米辛H、当归酰戈米辛H、当归酰戈米辛Q和巴豆酰戈米辛P。上述研究成果适用于复杂样品中筛选具有协同作用的活性物质,具有简便、高效、微型化等特点,整个样品可在较短的时间内完成(15 min)。本课题的研究成果将在长白山植物资源的应用研究方面起技术支撑作用。