中文摘要：

动物体细胞克隆技术结合体细胞基因打靶技术是当前研制动物乳腺生物反应器的主要研究策略。然而该研究思路面临的主要技术障碍是体细胞正常分裂次数有限而影响了细胞水平的操作。着重于这个问题，本研究拟将构建新型基因打靶载体，以无启动子的新霉素基因做为正筛选基因，以绿色荧光蛋白基因为负筛选基因。通过定点重组技术敲入人端粒酶基因，建立长寿型绵羊乳腺上皮细胞系，并研究其生理功能；以及做为核移植的供体细胞，通过研究体外克隆胚胎的发育状况，初步明确长寿型体细胞是否具有重编程的能力；进一步进行基因的替换研究，以获得高表达外源基因的乳腺上皮细胞系。本项目的研究成果将可为动物乳腺生物反应器的研究提供必要的研究积累和理论参考。该研究符合自然科学基金项目的要求，具有很好的可持续性研究的特色。

结论摘要：

动物体细胞克隆技术结合体细胞基因打靶技术是当前研制动物乳腺生物反应器的主要研究策略。然而该研究思路面临的主要技术障碍是体细胞正常分裂次数有限而影响了细胞水平的操作。着重于这个问题，本研究构建新型基因打靶载体，以无启动子的新霉素基因做为正筛选基因，以绿色荧光蛋白基因为负筛选基因。通过定点重组技术敲入人端粒酶基因，建立长寿型绵羊乳腺上皮细胞系，并研究其生理功能；以及做为核移植的供体细胞，通过研究体外克隆胚胎的发育状况，初步明确长寿型体细胞是否具有重编程的能力；同时在打靶载体中引入有价值的目的蛋白，以获得高表达外源基因的乳腺上皮细胞系。本项目的研究成果将可为动物乳腺生物反应器的研究提供必要的研究积累和理论参考。该研究符合自然科学基金项目的要求，具有很好的可持续性研究的特色。