中文摘要：

在国科金重点项目"恶性骨肿瘤个体化综合治疗的应用基础研究"中，我们采用电融合方法成功地制备了异体树突状细胞与大鼠骨肉瘤融合瘤苗，该瘤苗在体外实验和体内主动免疫治疗实验中都诱导出特异性抗骨肉瘤免疫效应。但是，由于DC融合细胞体外制备培养繁琐、扩增有限；且DC经融合电流冲击后，活性减低，难以质控，导致临床大量应用受限。因此，我们将研究方向转至采用异体骨肉瘤细胞mRNA电转染DC的新型瘤苗制备与鉴定。本项目拟采用mRNA提取技术、免疫磁珠分离筛选技术、绿色荧光蛋白标记技术以及电转染等技术，观察异体大鼠骨肉瘤细胞mRNA经提取、纯化后，通过电穿孔技术转染DC，制备成异体骨肉瘤mRNA-DC瘤苗，探讨最佳的电转染条件，并检测该瘤苗在体外、体内诱导特异性抗骨肉瘤免疫效应，为基于临床应用的DC瘤苗的设计和制备提供切实的实验依据和新思路，建立一种有效可行的骨肉瘤生物治疗新方法。

结论摘要：

应用肿瘤细胞来源的mRNA转染至树突状细胞已逐渐成为一种颇具潜能的抗肿瘤免疫治疗新方法。但目前针对异体肿瘤来源的mRNA转染DCs的瘤苗研究，尚不够系统明晰。本研究旨在探讨异体大鼠骨肉瘤细胞mRNA电染树突状细胞瘤苗在荷瘤动物模型诱导的特异性抗肿瘤免疫学效应。提取UMR108细胞mRNA的步骤分为两步，首先采用Trizol法提取肿瘤细胞总RNA，继而采用磁珠法纯化mRNA。采用电穿孔的方法将mRNA转染至SD大鼠骨髓单核细胞来源的DCs制备瘤苗，通过荷瘤动物模型观察其特异性抗肿瘤效应。异体骨肉瘤mRNA转染DCs瘤苗可诱导针对自体肿瘤特异性的CTLs效应，且该效应可以被抗MHC-I抗体加以抑制。在体内预防保护作用和主动免疫治疗实验中，均有70%的异体mRNA-DC瘤苗接种大鼠可以有效地抵抗肿瘤细胞攻击，而得以长期存活。该研究验证了异体肿瘤细胞来源的mRNA可以对特异性肿瘤治疗提供抗原信息，尤其是以DC为基础的免疫治疗中优势明显，可能为很多尚缺少特异性抗原的肿瘤患者，提供了更多的治疗选择。