中文摘要：

已证实"免疫佐剂"热休克蛋白70(HSP70)偶联抗原肽复合物可诱发肿瘤特异性主动免疫。甲胎蛋白(AFP)作为一种肿瘤胚胎抗原,免疫原性很弱,课题组前期研究表明通过基因重组或化学偶联构建的热休克蛋白70-甲胎蛋白(HSP70-AFP)复合物可增强AFP免疫原性并诱发针对AFP的特异性淋巴细胞免疫效应。研究表明树突状细胞(DC细胞)通过识别肿瘤细胞表达的热休克蛋白复合物介导特异性免疫反应。因而HSP70-AFP复合物诱发的特异性免疫效应机制可能是通过HSP70修饰的AFP抗原激活的特异性DC细胞介导的特异性细胞毒效应。本研究在既往基础上应用戊二醛交联法构建HSP70-AFP复合物,以其负载小鼠DC细胞,通过动物体内外免疫细胞毒性实验证实重组复合物激活的特异性DC细胞介导的CD8+T细胞和NK细胞诱发了针对AFP的特异性免疫效应,阐明复合物抗瘤免疫机制对于建立特异性DC细胞免疫治疗有重要意义。

结论摘要：

已证实"免疫佐剂"热休克蛋白70(HSP70)偶联抗原肽复合物可诱发肿瘤特异性主动免疫。甲胎蛋白(AFP)作为一种肿瘤胚胎抗原,免疫原性很弱,课题组前期研究表明通过基因重组或化学偶联构建的热休克蛋白70-甲胎蛋白(HSP70-AFP)复合物可增强AFP 免疫原性并诱发针对AFP 的特异性淋巴细胞免疫效应，但HSP70-AFP复合物引起特异性免疫效应的具体机制还不明确。研究表明树突状细胞(DC 细胞)通过识别肿瘤细胞表达的热休克蛋白复合物介导特异性免疫反应。因而HSP70-AFP复合物诱发的特异性免疫效应机制可能是通过HSP70修饰的AFP 抗原激活的特异性DC细胞介导的特异性细胞毒效应。本研究在既往基础上应用戊二醛交联法构建HSP70-AFP 复合物, 以其负载小鼠DC 细胞, 通过动物体内外免疫细胞毒性实验证实重组复合物激活的特异性DC 细胞介导的CD8+T 细胞和NK 细胞诱发了针对AFP的特异性免疫效应,阐明复合物抗瘤免疫机制对于建立特异性DC 细胞免疫治疗有重要意义。 研究结果显示应用重组构建的HSP70-AFP复合物，免疫小鼠后通过激活DC细胞，CD8+ T细胞和NK细胞介导的细胞免疫反应，诱导了针对表达AFP的肝癌细胞的杀伤效应；各组小鼠脾制备混合淋巴细胞悬液通过特异性免疫磁珠分离获得纯化的DC细胞，NK细胞，CD8+ T细胞，经流式细胞仪进行鉴定后，体外细胞因子检测和特异性细胞毒性实验进一步明确了重组复合物抗瘤免疫的效应机制。体外淋巴细胞毒性实验结果证实HSP70-AFP重组复合物发挥特异性杀伤肿瘤细胞的机制主要依赖CD8+ 细胞毒性T细胞和NK细胞，DC细胞对肿瘤细胞也有一定的杀伤作用，各激活后的免疫效应细胞通过分泌IFN-γ, TNF-α, 颗粒酶B和穿孔素杀伤肿瘤。体内的试验结果也进一步证实，相比HSP70，AFP蛋白免疫组，平衡盐水组及空白模型组，HSP70-AFP重组复合物能够明显抑制瘤块的生长，瘤体重量和体积均小于对照各组，具有明显的统计学意义。研究结果进一步明确了HSP70-AFP重组复合物抗瘤免疫的分子机制是通过CD8+ T细胞，NK细胞和DC细胞的协同作用机制发挥抑瘤效应，阐明重组复合物特异性抗瘤免疫效应机制对于之后临床前期试验研究和建立个体化与特异性DC细胞，NK细胞介导的免疫治疗策略具有重要意义。