用mRNA差异显示技术研究盘基网柄菌野生型和突变型细胞多细胞发育重要阶段表达基因,得到d12a,d14c,d16b差异片段.d12a与盘基网柄菌内虚拟蛋白有相似性,d14c与组氨酸激酶基因,STATc蛋白基因和同源框蛋白基因相似性达90%以上,d16b与核受体辅转录激活子CBP/p300有一定的相似性,它们与盘基网柄菌细胞发育和分化有密切关系。克隆了尿囊酸酶基因,其开读框长1100bp,编码约42kD蛋白.用纯化蛋白制备了多克隆抗体,效价达164000。结果表明制备的抗原有较强的专一性。在细胞丘和蛞蝓体阶段,尿囊酸酶的表达量是多细胞聚集阶段的一倍,这种增高与gp150蛋白表达存在相关性。荧光定位研究发现尿囊酸酶主要定位在靠近细胞质膜附近,存在类capping结构;在多细胞体的外周荧光较强,这与gp150蛋白分布位置十分相近。用扩增出的尿囊酸酶基因642bp的长片段与397bp短片段反向连接成RNA干扰载体,转染后得阳性克隆RNAi-allc,转染细胞不能完成发育,检测不到尿囊酸酶的免疫条带,酶表达率下降到0.67%。表明载体有明显干扰作用,说明尿囊酸酶对盘基网柄菌细胞发育有调控作用。
英文主题词Dictyostelium; allantoicase; gp150; RNAi; antibody