本项目拟在已完成的体外培养、增殖、鉴定脊髓神经干细胞的研究基础上,利用RT-PCR技术、免疫组织化学及显微细胞移植技术等方法研究臂丛神经根性撕脱伤后脊髓的病理、生化改变,确定适宜神经干细胞移植的最佳时间。将神经干细胞植入臂丛神经根性损伤动物模型的相应节段脊髓前角内,联合局部应用鹿茸多肽,观察神经干细胞的存活、生长、分化以及实验动物的运动功能恢复状况,阐明神经干细胞移植促进其功能恢复的机理,为合理利用神经干细胞移植治疗臂丛神经根性损伤提供理论和实验依据。
臂丛神经根性撕脱伤是一世界性难题,主要采用神经移位的方法重建臂丛神经功能,但由于供体神经有限而限制了其临床应用。本项目中,我们将撕脱的臂丛神经根直接回植入损伤的脊髓内,同时应用转基因神经干细胞移植的方法补充缺失神经元,重建脊髓与周围神经的连续性,以达到实验性治疗臂丛神经根性撕脱伤的目的。本项目相继开展了如下工作并取得创新性成果 1、成功建立了大鼠臂丛神经根性撕脱后神经根回植的动物模型。 2、建立了一套稳定的神经干细胞培养体系,利用无血清培养技术能够获得纯度较高的神经干细胞系。 3、研究了鹿茸多肽体外诱导神经干细胞分化的作用,在国内外首先证实其在促进神经干细胞向神经元分化方面有着明显的作用。 4、用不同浓度NGF诱导神经干细胞分化,发现NGF能促进新生神经元突起的生长 。 5、以PGET-1 TA质粒及pLEGFP-C1质粒为载体将体外扩增的NT-3基因成功导入神经干细胞内,并将该转基因神经干细胞移植于臂丛神经根性撕脱伤动物模型的C6脊髓节段内,我们观察到了移植细胞的存活、分化、迁移并生出突起,且实验动物运动功能得到了一定程度的恢复。