中文摘要：

烟粉虱传播的双生病毒病是世界范围内众多作物上重要病害，近年在我国华南、华东及华北等十多个省流行的番茄黄化曲叶病即是由该类病毒侵染引起。本项目以广东番茄黄化曲叶病毒(TYLCGuV)为研究对象，应用酵母双杂交技术，从介体B型烟粉虱cDNA文库鉴定出与该病毒衣壳蛋白(CP)互作的受体蛋白基因；用原核系统表达出CP及受体蛋白，制备抗体，应用蛋白互作分析仪及免疫共沉淀试验加以检测与验证，鉴定出烟粉虱体内CP的受体蛋白；构建CP系列突变体，应用上述技术加以鉴定与验证，获得该病毒CP的功能域；进一步通过功能域突变体侵染性克隆接种及烟粉虱传毒试验加以检验，从而明确TYLCGuV CP与烟粉虱受体蛋白互作的功能域。本项目在国内外率先开展双生病毒CP与烟粉虱互作的功能域及介体烟粉虱体内受体蛋白研究，为明确烟粉虱传播双生病毒机制，探索该病害防治新途径奠定基础。因此，本项目具有重要的科学意义和应用前景。

结论摘要：

番茄黄化曲叶病是目前我国番茄生产上毁灭性病毒病之一。该病毒是由烟粉虱以持久方式传播，推测传播介体烟粉虱体内存在与番茄黄化曲叶病毒衣壳蛋白（Coat protein，CP）相互特异识别的蛋白因子，鉴定番茄黄化曲叶病毒衣壳蛋白与介体烟粉虱互作受体蛋白及其功能域，对于揭示烟粉虱传播双生病毒机制及其防控技术研究具有重要意义。本项目以广东番茄黄化曲叶病毒（Tomato yellow leaf curl Guangdong virus，TYLCGuV）和B型烟粉虱为研究对象，应用酵母双杂交方法，从B型烟粉虱 cDNA文库中筛选到与该病毒衣壳蛋白（CP）存在互作的蛋白因子PDCD4、EF1A、RLPS22；利用荧光共定位及Pull down 试验，鉴定出PDCD4与TYLCGuV CP存在互作；通过设计特异引物分别获得N端截短60、90、120个氨基酸和C端截短60、90、120个氨基酸的CP系列突变体，应用酵母双杂交方法鉴定出CP与PDCD4蛋白互作的功能域是位于N端的60氨基酸；通过基因克隆方法构建TYLCGuV CP功能域突变体的侵染性克隆，该突变体不能被B型烟粉虱有效传播侵染番茄，进一步验证了CP N端的60氨基酸是其功能域。与此同时，通过对广东及华南地区烟粉虱种群与双生病毒互作的监测，鉴定出广东烟粉虱隐种主要有MEAM1（也即B型烟粉虱）等4种，监测出广东及华南地区双生病毒主要有18种，探明了木尔坦棉花曲叶病毒种群遗传特征及致病性。本项目首次鉴定出烟粉虱体内与TYLCGuV CP互作的受体蛋白PDCD4，以及初步明确了CP的N端前60个氨基酸区域是其与PDCD4互作的功能域。这些研究结果向阐明烟粉虱传播TYLCGuV的机制迈进了一大步，也为探索通过干扰烟粉虱与TYLCGuV相互特异识别的防控新途径奠定了基础。