同真核细胞相似,细菌中也存在具有调控作用的非编码RNA(sRNA)。金黄色葡萄球菌是一类重要的病原菌,已有报道表明一些sRNA参与了金葡菌的致病过程。我们课题组利用RNA伴侣分子Hfq蛋白钓取并克隆了两条新的金葡菌sRNA-L8和L10,并构建了相应的缺失突变菌株。已有的实验结果表明Hfq蛋白能够影响这两种sRNA在细菌内的水平。初步的应激实验和动物实验表明,L8的水平与金葡菌的应激和致病能力负相关,而L10呈正相关。本课题将在已有的工作基础上,研究L8和L10的自身表达调控,筛选并鉴定其作用的靶基因,详细阐述其对靶基因的调控机制,从而阐明这两种sRNA如何参与金葡菌的应激和致病过程,进而揭示其生物学功能。该课题的开展将推动金葡菌中sRNA的相关研究,同时也会为抗金葡菌感染提供潜在的药物靶标和新的理论基础。
sRNA;S. aureus;stress response;pathogenicity;positive or negative related
同真核细胞相似,细菌中也存在具有调控作用的非编码RNA(sRNA)。金黄色葡萄球菌是一类重要的病原菌,已有报道表明一些sRNA参与了金葡菌的致病过程。我们课题组利用RNA伴侣分子Hfq蛋白钓取并克隆了两条新的金葡菌sRNA-L8和L10,并构建了相应的缺失突变菌株。已有的实验结果表明Hfq蛋白能够影响这两种sRNA在细菌内的水平。初步的应激实验和动物实验表明,L8的水平与金葡菌的应激和致病能力负相关,而L10呈正相关。本研究中构建L8基因的缺失突变体(Mut)和回复突变体(RM),利用基因芯片和生物信息学方法,对L8作用的靶基因了预测。进一步通过RT-PCR、构建lacZ报告载体等方法,对靶基因进行了验证,结果显示L8可能下调SAV2109基因的表达。L8稳定性的研究,通过构建Hfq蛋白、RNase III蛋白突变体菌株,利用qRT-PCR的方法,检测L8的表达水平,结果表明Hfq蛋白缺失的菌株中L8的表达水平明显下调,而RNase III缺失的菌株中L8的表达水平明显上调,表明这两种蛋白均参与L8稳定性的调控。本研究将推动金葡菌中sRNA的相关研究,同时也会为抗金葡菌感染提供潜在的药物靶标和新的理论基础。