中文摘要：

课题组前期研究发现并报道了HBV编码的preS2蛋白通过与hTERT启动子上的PRR区域相互作用反式激活hTERT表达，进而持续活化端粒酶导致细胞无限增殖，提出HBV编码preS2蛋白的反式激活作用在肝细胞肝癌发生中发挥重要作用。通过荷人肝癌裸鼠模型研究发现阻断preS2表达显著抑制HepG2.2.15细胞的裸鼠成瘤率及裸鼠体内肿瘤生长，HE染色显示瘤内血管生长受到抑制。提示preS2可能作用于肿瘤新生血管生成。为验证该假说，本课题拟通过临床标本检测、动物模型、细胞共培养以及过表达和基因沉默实验，研究preS2蛋白对HCC血管生成的作用及其对血管生成相关因子VEGF-A表达的影响；并通过体外细胞模型启动子调控研究，深入探讨preS2对VEGF-A表达调控的分子机制。研究不仅有助于进一步揭示preS2蛋白在HBV相关HCC发生中的作用机制，并将为HBV相关HCC的临床干预提供可靠依据。

结论摘要：

一、临床肝细胞肝癌标本检测，确立preS2的表达与血管生成在HBV相关HCC发生中的协同关系。 1、收集30例临床肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma, HCC）组织标本，按乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染和preS2表达情况分为两组，进行石蜡切片和免疫组化分析。两组间CD34标记的微血管密度（Microvessel density, MVD）、血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor, VEGF)存在表达差异；相关性分析显示preS2的表达强弱与MVD、VEGF表达呈正相关。 2、preS2的表达与HCC肿瘤病理分级及肿瘤转移相关。 二、体外细胞实验，正反向论证preS2通过影响VEGF-A的分泌表达促进血管内皮细胞的增殖，进而参与HCC血管生成。 1、体外细胞共培养CCK-8检测提示肝癌细胞中preS2过表达，共培养的血管内皮细胞较对照组增殖水平升高；封闭preS2表达，共培养的血管内皮细胞较对照组增殖水平降低。 2、preS2过表达，肝癌细胞VEGF-A 表达水平升高；封闭preS2表达，肝癌细胞VEGF-A 表达水平降低。 三、preS2蛋白在转录水平调控VEGF-A的表达。 构建VEGF-A全长和核心启动子荧光素酶报告质粒，与preS2表达质粒共转染肝癌细胞，双荧光检测结果显示preS2蛋白对VEGF-A启动子具有反式激活作用，且激活作用具有剂量依赖性。 四、在原有计划基础上，增加以下内容 1、30例肝细胞肝癌组织标本免疫组织化学染色分析显示ZHX2的核转位表达与HCC发生时GPC3的激活表达相关。 2、全长、包含或缺失核定位信序列的ZHX2绿色荧光融合蛋白表达载体与GPC3核心启动子报告质粒共转染肝癌细胞，双荧光素酶检测显示核定序列对ZHX2转录激活GPC3起关键作用。