随着转基因技术在农业生产上广泛应用,构建高效特异地表达外源基因的启动子的需求日益迫切。研究特异表达启动子的特性并确定其功能元件的序列组成,对于更有针对性地运用生物技术进行农作物优良性状的改良具有重要的理论和现实意义。本项目利用5'删除技术和35S TATA box序列构建启动子序列::GUS融合表达载体,确定根特异性表达的启动子最短必需序列和其它特异启动子功能元件序列及功能;比较松树根特异性启动子在烟草与在水稻中的表达部位与活性差异,为将异源材料的启动子在单子叶作物中应用奠定基础;构建高效表达启动子最短必需序列与2个耐盐基因的表达载体并转化水稻,筛选根特异性表达的耐盐植株;比较不同种类启动子对转基因水稻植株农艺性状的影响以验证松树启动子在水稻中的应用效果,为设计高效表达的新型启动子提供资料;还将研究转基因株系中外源基因遗传与表达以及外源基因表达与耐盐性之间的相关性,为揭示耐盐机理奠定基础。
利用PCR方法分别从裸子植物乔松和美洲东部白松中克隆了PR10基因的编码区(CoPgPR10和CoPsPR10)以及它们的启动子序列(PmPgPR10和PmPsPR10),并进行了序列和结构分析。利用5'末端删除,构建了启动子不同序列与GUS融合表达载体并转化烟草和拟南芥,进行高效表达启动子必需最短序列的确定,现已得到PR10基因的一个800bp序列PmPsPR10-800,发现该序列具有很强的根表达特异性,其活性比全长启动子PmPsPR10活性还高。构建了启动子及其不同序列(PmPgPR10、PmPsPR10、PmPsPR10-800、35S)与耐盐相关基因(TaNHX2、CMO/BADH、mtlD/gutD) 的嵌合表达载体并转化水稻,已从中筛选出根特异性表达的T3代耐盐植株。转PmPs-TaNHX2日本晴、转PmPs-CMO/BADH和转PmPs-mtlD/gutD的秀水11植株的耐盐性明显要高于相应的对照植株。不同启动子驱动的转TaNHX2基因日本晴、mtlD/gutD基因秀水11、转mtlD/gutD基因特青稻米在米质、安全性等方面分别与非转基因稻米相似,没有明显差异。