中文摘要：

P2Y12受体在ADP介导的血小板激活信号通路中起着核心作用，已成功用于抗血栓药物筛选。前期研究证实毛冬青中乌苏烷型三萜（UTS）有确切的抗血栓作用，该类成分可通过阻断P2Y12来抑制血小板聚集。本项目拟对临床上使用广泛、心血管方面疗效确切的四种冬青属植物（毛冬青、苦丁茶冬青、梅叶冬青、铁冬青）中的UTS进行分离、制备，以P2Y12抑制作用为指导，结合体内外抗血栓实验和分子生物学方法，对UTS单体化合物或化合物群的抗血栓活性进行系统筛选和评价，初步阐明其抗血栓活性构效关系，在此基础上采用Western Blot检测活性成分对P2Y12和P2Y1受体表达的影响，用放免法、酶联免疫法等检测血小板激各活途径中关键因子（cAMP/cGMP、游离钙离子、TXB2等）浓度的变化，探讨其抗血栓作用机制。本研究为从中药中寻找和筛选新型抗血小板药物提供了理论与实践基础。

结论摘要：

P2Y12受体在ADP介导的血小板激活信号通路中起着核心作用，以P2Y12受体为靶点发展新的抗血栓药物，是近年来抗血栓药物研究的重要领域之一。冬青属许多植物具有悠久的民间药用历史，在心血管疾病方面具有优良防治功效，然而其药效物质基础尚未明确，基于此，本项目以抗血栓活性为切入点展开了相关研究。本课题综合运用现代色谱、波谱技术并结合化学手段，从四种冬青属植物（毛冬青、铁冬青、梅叶冬青、苦丁茶冬青）中分离、制备和鉴定了50余个三萜及其苷类化合物（IPTS），其中有5个新化合物，在自然界首次发现了和苯丙素缩合的乌苏烷型五环三萜皂苷类化合物；建立了体外细胞模型和体内动物模型相结合的活性评价方法，通过抗血栓活性筛选，发现了数个抗血栓活性化合物。本项目在分子水平从多环节对IPTS类组分的抗血栓作用机制进行了深入研究，发现该类组分能抑制ADP诱导的血小板聚集，显著降低形成血栓的质量并减轻血管损伤，显著降低FIB、TXB2的含量和血小板胞浆游离Ca2+浓度，并能抑制P2Y12、GPIIb/IIIa的表达，显著提高血小板内cAMP水平，具有抗动脉、静脉血栓作用。研究结果提示IPTS类组分对血小板内P2Y12的影响以及对P2Y12受体信号通路相关因子的作用，可能是IPTS抗血栓的主要机制之一。本研究证实冬青属植物中的IPTS类成分具有抗血栓活性，是其心血管方面药效的重要物质基础。此外，本项目研究中还首次发现多个IPTS类化合物体外未显示抗血栓活性，但具有显著的体内抗血栓活性，这提示我们IPTS的抗血栓活性可能与其体内代谢转化过程密切相关，值得进行深入研究。本研究为从中药中寻找和筛选新型抗血小板药物提供了实践基础，为冬青属植物的开发利用提供了科学依据和基础研究资料。